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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

目的基因片段的PCR擴(kuò)增與克隆

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1.PCR技術(shù) 
PolymeraseChainReaction聚合酶鏈反應(yīng) 
它是一種模擬天然DNA復(fù)制過程,在有DNA模板、dna聚合酶(Taq酶)、RNA引物和四種dNTP的情況下,通過高溫變性(90℃-95℃,1-2min),低溫退火(25℃-37℃,1-2min),中溫延伸(60℃-75℃,90sec-5min),這樣反復(fù)循環(huán)的過程中,在體外擴(kuò)增特異性DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

1)、pcr反應(yīng)成分: 
taqDNA聚合酶 
引物濃度:一般0.1-0.5μmol/L 
dNTP:一般為50-200μmol/L 
Mg2+ 
模板:PCR對(duì)模板的要求不高,單、雙鏈DNA均可,但樣品中不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制劑以及能與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。 
添加劑:DMSO(二甲基亞楓),提高擴(kuò)增效率及特異性 
(1)理論上PCR合成產(chǎn)物的數(shù)量經(jīng)過每輪循環(huán)都將增加一倍,應(yīng)按2n的指數(shù)方式遞增,PCR反應(yīng)30輪循環(huán)后,PCR擴(kuò)增應(yīng)達(dá)到230個(gè)拷貝,約109個(gè)拷貝。但由于DNA聚合酶的質(zhì)量、待擴(kuò)增片段的序列及反應(yīng)系統(tǒng)的條件等各種因素的影響,實(shí)際擴(kuò)增效率比預(yù)期的要低,一般可達(dá)106-107個(gè)拷貝
平臺(tái)效應(yīng)”:PCR反應(yīng)中,當(dāng)引物-模板與DNA聚合酶達(dá)到一定比值時(shí),DNA聚合酶催化反應(yīng)趨于飽和,即PCR反應(yīng)不再增加。平臺(tái)效應(yīng)在PCR反應(yīng)中是不可避免的,但一般在平臺(tái)效應(yīng)出現(xiàn)前,PCR產(chǎn)物的數(shù)量足以滿足實(shí)驗(yàn)的需要。
(2)PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
PCR方法操作簡(jiǎn)便,但影響因素頗多,因此需要根據(jù)不同的DNA模板,摸索zui適條件。主要從:
反應(yīng)的特異性、敏感性、真實(shí)性、擴(kuò)增效率等四個(gè)方面衡量PCR反應(yīng)的結(jié)果。
①循環(huán)參數(shù) 變性 退火 延伸
②PCR反應(yīng)成分
(3)PCR反應(yīng)引物的設(shè)計(jì)
引物的設(shè)計(jì)在整個(gè)PCR擴(kuò)增中占有十分重要的地位。

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