亚洲国产精品二区久久,日本美女后入式午夜视频在线观看,国产污视频在线观看,欧美日韩国产精品中文字幕在线观看

上海士鋒生物科技有限公司
中級會員 | 第14年

13127537090

當(dāng)前位置:首頁   >>   資料下載   >>   PCR疑難解答

標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

PCR疑難解答

時間:2016-5-3閱讀:753
分享:
  • 提供商

    上海士鋒生物科技有限公司
  • 資料大小

    50.6KB
  • 資料圖片

    查看
  • 下載次數(shù)

    137次
  • 資料類型

    PNG 圖片
  • 瀏覽次數(shù)

    753次
點(diǎn)擊免費(fèi)下載該資料

當(dāng)酶反應(yīng)混合物以70℃“熱啟動”開始循環(huán)時,切記在加入酶后稍微振蕩一下,因?yàn)樵?.2-ml的pcr管中不能均勻傳熱。 
不要隨意減少dNTP的用量,它是一個系統(tǒng)的因素,必須與其它成份保持平衡。 
對于有問題的PCR反應(yīng),例如模板的量少,模板不純和環(huán)狀模板等,先嘗試加Taq酶前的體系進(jìn)行預(yù)變性,后加模板進(jìn)行正常pcr擴(kuò)增。 
沒有擴(kuò)增產(chǎn)物: 
在提供MgCl2緩沖液中,以0.25mmol/L為梯度增加MgCl2濃度;無MgCl2的緩沖液以0.5 mmol/L為梯度增加MgCl2濃度。 
泳道中出現(xiàn)模糊條帶,如果DNA模板中存在RNA,則按上述提示濃度補(bǔ)加MgCl2,因?yàn)樵赑CR反應(yīng)中可能缺少游離的Mg2+。 
檢查退火溫度和變性條件,如果有需要的話,可降低退火溫度。 
檢查模板和引物的用量。 
增加循環(huán)次數(shù)和/或模板DNA的用量。 
泳道中出現(xiàn)模糊條帶: 
減少循環(huán)次數(shù)或模板DNA的用量。 
提高退火溫度,但不要超過68℃。 
重新設(shè)計(jì)引物或設(shè)計(jì)更長的引物。 
其他值得注意的條件: 
建議使用0.2-ml薄壁管。厚壁管在92℃時不能有效地使模板變性。 

反應(yīng)體積為50ml,用30ml礦物油覆蓋(對蓋子加熱的PCR儀可以不加)。 
大多數(shù)反應(yīng)中,0.75ml(0.5~1ml)的酶量在大多數(shù)情況下可以得到滿意的結(jié)果。 
建議使用1.75mmol/L MgCl2∶350mmol/L dNTP或2.25mmol/L MgCl2∶500mmol/L dNTP組合的混合物。然而要得到結(jié)果,優(yōu)化Mg2+的濃度是必需的。 
基因組DNA模板的質(zhì)量顯著影響PCR反應(yīng)。因此使用瓊脂糖凝膠電泳來檢測DNA的長度。DNA片段長度可以超過50kb,傳統(tǒng)的基因組DNA能擴(kuò)增片段至10kb。 
要擴(kuò)增更長的片段應(yīng)使用超純或高分子量的DNA。請查閱高分子量DNA提取操作過程相關(guān)文獻(xiàn)。 
降低二級結(jié)構(gòu)和引物二聚物形成的可能性。進(jìn)行長片段PCR擴(kuò)增時,引物長度一般為24~34個核苷酸,溶點(diǎn)在60~68℃間。使用這類引物可提高PCR反應(yīng)的退火溫度來增加反應(yīng)的特異性。這點(diǎn)非常重要,長片段擴(kuò)增的效果往往受到非特異性短片段優(yōu)先擴(kuò)增的影響。 
變性:*步變性在94℃下進(jìn)行2分鐘。在循環(huán)過程中盡可能縮短變性時間(94℃下進(jìn)行20--30秒),除非模板中富含GC,則95℃下變性30秒。這可以防止DNA脫嘌啉和鏈斷裂,對于所需擴(kuò)增的基因組DNA片段終長度超過12 kb時,應(yīng)該盡可能的降低變性溫度。 
延伸:68--72℃下進(jìn)行延伸操作。 
循環(huán)延伸:盡量采用循環(huán)延伸的條件,若PCR儀無此功能,則必須增加延伸的時間,例如在擴(kuò)增10kb片斷時,延伸時間用10分鐘替代原來的8分鐘。 
長片斷PCR系統(tǒng)擴(kuò)增的片斷其3’-末端帶有一個突出的A,因此建議采用T/A克隆。若要進(jìn)行平端可隆,可用Klenow酶和T4 DNA多聚酶將PCR產(chǎn)物補(bǔ)平后再進(jìn)行。 
測序時因酶的混合物帶有3’→5’外切酶活性,用Sanger方法進(jìn)行測序不能產(chǎn)生均一的(染色體)帶型。 
引物設(shè)計(jì): 
一般長度20-30bp; 
至少50%的GC含量; 
避免引物二聚體和二級結(jié)構(gòu); 
引物對的Tm值應(yīng)該接近。 
也可下列圖示提示找到解決問題的突破口: 

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
国奴精品毛片av一区二区三区| 欧美日韩视频在线一区二区| 泰国无码AV片在线观看| 在线免费看污视频| 久久久三级黄片免费视频| 日韩欧美一区二区三区在线视频| 美女的粉嫩小逼视频特写| 这里只有久久精品| 国产精选三级在线观看| 大黑屌日本另类肛交| 日韩美女在线视频一区不卡| av中文字幕一区二区精品久久| 久久99国产中文| 操逼动漫首页登录| 国产精品亚洲一区二区三区极品| 久久高清中文字幕第一页| 国产天美传媒剧免费观看| 欧美国产中文高高靖| 在线看免费无码a片视频| 亚洲欧美一区二区三区孕妇| 激情久久久久久久久久久| 大鸡吧天天草黑逼| 婷婷6月天丁香综合在线| 欧美成人3p视频| 24日本精品视频免费| 手机成人三级a在线观看| 国奴精品毛片av一区二区三区| 91久久愉拍愉拍国产一区| 男人的天堂日本在线观看| 春宵福利导航91| 欧美一级特黄大片在线看| 中日韩中文字幕无码一本| 中国熟女色av夜夜嗨| 国产天堂网一区二区三区 | 日本一二区视频在线观看| 亚洲国产AV精品一区二区色欲| 男的日女生批网页| 日韩欧美中文字幕国产精品| 男人草女人的视频免费看| 国产日韩一区二区三区在线播放| 农村胖肥胖女人操逼视频|