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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)綜述

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一.基本原理 
1.pcr反應(yīng)動(dòng)力學(xué) 
右圖為PCR反應(yīng)曲線(橫坐標(biāo)為循環(huán)數(shù),縱坐標(biāo)表征產(chǎn)物量),不同的曲線代表初始模板量不同的 PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)公式為: 
Cn=C0(1+E)n 
其中C0和Cn分別為初始模板和n循環(huán)的拷貝數(shù),n為循環(huán)數(shù),E為擴(kuò)增效率(0≤E≤1),理想狀態(tài)下(即每個(gè)循環(huán)中所有模板均與引物結(jié)合并等到擴(kuò)增),E為1。 
實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)綜述

由上圖可知,只有在線性區(qū)段E值才為定值,這樣才能通過檢測(cè)Cn定量C0,由于終點(diǎn)檢測(cè)不能保證在線性區(qū)段,所以重復(fù)性不好,實(shí)時(shí)檢測(cè)(每個(gè)循環(huán)檢測(cè)一次)技術(shù)解決了這個(gè)問題。 
2.定量pcr原理 
實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)綜述定量pcr是將待測(cè)標(biāo)本與一系列濃度(C0)已知的標(biāo)準(zhǔn)品在同一條件下共同擴(kuò)增,并進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)值及已知的C0值作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,如右圖(橫作標(biāo)為的C0對(duì)數(shù)值),再根據(jù)待測(cè)標(biāo)本的檢測(cè)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到待測(cè)標(biāo)本的C0值。 
3.信號(hào)產(chǎn)生 
目前定量PCR技術(shù)信號(hào)產(chǎn)生都是基于FRET (fluorescence resonance energy transfer)的原理,即在一定波長的光激發(fā)下,一個(gè)熒光基團(tuán)A發(fā)光,并且被鄰近的另一個(gè)熒光基團(tuán)B吸收,使熒光基團(tuán)B發(fā)光。如檢測(cè)熒光基團(tuán)A,應(yīng)在FRET消除后;如檢測(cè)B,則應(yīng)在FRET發(fā)生時(shí)檢測(cè)。 
根據(jù)信號(hào)產(chǎn)生方式的不同可將定量PCR技術(shù)分為三類:TaqMan Probes技術(shù);Hybridization Probes技術(shù);Molecular Beacons技術(shù)。 
TaqMan Probes技術(shù)(右圖A)是Perkin 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)綜述Elmer公司1995年研制,利用熱穩(wěn)定DNA聚合酶5’→3’外切酶活性,將TaqMan 探針5’端熒光基團(tuán)切去,使之與3’端熒光基團(tuán)分離、熒光淬滅消失,在特定波長下檢測(cè)5’端熒光基團(tuán)即可表征PCR產(chǎn)物的量。
Hybridization Probes技術(shù)(右圖B)是Roche公司建立的,PCR反應(yīng)退火過程中,兩個(gè)探針與模板雜交(相鄰一個(gè)堿基),發(fā)生FRET,這時(shí)檢測(cè)第二個(gè)熒光基團(tuán)即可表征PCR產(chǎn)物的量。Hybridization Probes技術(shù)要求熱穩(wěn)定DNA聚合酶不具備5’→3’外切酶活性,而是在引物延伸過程中被取代,使探針可在下一循環(huán)再與模板雜交,如探針被降解,可導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。

Molecular Beacons技術(shù)(上圖C)利用莖環(huán)結(jié)構(gòu)的探針,當(dāng)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)時(shí),發(fā)生熒光淬滅,退火過程中,探針與模板雜交,熒光淬滅消失,在特定波長下檢測(cè)5’端熒光基團(tuán)即可表征PCR產(chǎn)物的量。

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