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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

引物設(shè)計(jì)基本原則

時(shí)間:2016-6-12閱讀:1201
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引物設(shè)計(jì)原則:

1。長度 一般為15-30bp,常用的是18-27bp,但不能大于38,因?yàn)檫^長會導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃,即taq酶的zui適溫度

2。堿基分布的均衡性 同一堿基連續(xù)出現(xiàn)不應(yīng)超過5個(gè)

GC含量一般40-60%

GC含量太低導(dǎo)致引物Tm值較低,使用較低的退火溫度不利于提高PCR的特異性

GC含量太高也易于引發(fā)非特異擴(kuò)增。

3。引物Tm值 一般要求:55℃-65℃。

計(jì)算:

對于低于20個(gè)堿基的引物,Tm值可根據(jù)Tm=4(G+C)+2(A+T)來粗略估算

對于較長引物,Tm值則需要考慮熱動力學(xué)參數(shù),從“zui近鄰位”的計(jì)算方式得到,這也是現(xiàn)有的引物設(shè)計(jì)軟件zui常用的計(jì)算方式。

Tm = △H/(△ S + R * ln (C/4)) + 16.6 log ([K+]/(1 + 0.7 [K+])) - 273.15

4。引物二級結(jié)構(gòu) 引物二聚體

盡可能避免兩個(gè)引物分子之間3’端有有較多堿基互補(bǔ)發(fā)夾結(jié)構(gòu)尤其是要避免引物3’端形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),否則將嚴(yán)重影響dna聚合酶的延伸。

5。引物3’端 引物的延伸從3’端開始,因此3’端的幾個(gè)堿基與模板DNA均需嚴(yán)格配對,不能進(jìn)行任何修飾,否則不能進(jìn)行有效的延伸,甚至導(dǎo)致PCR擴(kuò)增*失敗。考慮到密碼子的簡并性,引物3’端zui后一個(gè)堿基不與密碼子第三個(gè)堿基配對。

6。引物5’端 引物5’端可以有與模板DNA不配對堿基,在5’端引入一段非模板依賴性序列。

5’端加上限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)序列(酶切位點(diǎn)5’端加上適當(dāng)數(shù)量的保護(hù)堿基)。

5’端的某一位點(diǎn)修改某個(gè)堿基,人為地在產(chǎn)物中引入該位點(diǎn)的點(diǎn)突變以作研究。

5’端標(biāo)記放射性元素或非放射性物質(zhì)(如、)。

6。引物的內(nèi)部穩(wěn)定性 過去認(rèn)為,引物3’端應(yīng)牢牢結(jié)合在模板上才能有效地進(jìn)行延伸,故3’端為G或C。

現(xiàn)在的觀點(diǎn)認(rèn)為,引物的5’端應(yīng)是相對穩(wěn)定結(jié)構(gòu),而3’端在堿基配對的情況下為低穩(wěn)定性結(jié)構(gòu),即3’端盡可能選用A或T,少用G或C。僅僅3’端幾個(gè)堿基與非特異位點(diǎn)上的堿基形成的低穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)是難以有效引發(fā)引物延伸的,如果3’端為富含G、C的結(jié)構(gòu),只需3’端幾個(gè)堿基與模板互補(bǔ)結(jié)合,就可能引發(fā)延伸,造成假引發(fā)。

7。引物的保守性與特異性 保守性:通用引物——檢測同一類病原微生物盡可能多的型別

特異性:避免非特異性擴(kuò)增

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