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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

組織培養(yǎng)細(xì)胞染色體制備

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組織細(xì)胞用于遺傳學(xué)分析zui常見的是體外培養(yǎng)的細(xì)胞株,多為惡性腫瘤細(xì)胞株,且呈貼壁生長,僅小數(shù)細(xì)胞株為懸浮生長。培養(yǎng)細(xì)胞有來源易得、細(xì)胞分裂率高和染色體標(biāo)本制出清晰度高等優(yōu)點。組織細(xì)胞染色體制備的關(guān)鍵是掌握好體外細(xì)胞的生長動態(tài),只有處在對數(shù)生的細(xì)胞才能出現(xiàn)較高的分裂相,所以積水仙素處理的時機及量是染色體標(biāo)本形態(tài)及分裂指數(shù)的關(guān)鍵。 
1、 實驗材料 
培養(yǎng)液(PRMI 1640、M199、DMEM等),小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素,刻度離心管,直吸管及彎頭吸管,培養(yǎng)瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。 
2、 培養(yǎng)液配制 
培養(yǎng)液 85-95% 
小牛血清 5-15% 
雙抗(選擇) 100u/ml 
3、 操作過程 
(1)培養(yǎng)細(xì)胞:選擇處于指數(shù)生、用大瓶培養(yǎng)的80-90%匯合單層培養(yǎng)細(xì)胞; 
(2)終止培養(yǎng):當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時,加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養(yǎng)混合液,置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6-10小時以抑制分裂期細(xì)胞停止于分裂中期;(3)聚集細(xì)胞: 
(A) 搖動法: 
可利用分裂中期細(xì)胞變圓與底物附著不牢特點,此時可持培養(yǎng)瓶,左右反復(fù)橫向水平搖動,可使90%的中期分裂細(xì)胞從瓶壁脫落; 
(B) 消化法: 
將培養(yǎng)液倒入離心管內(nèi),給培養(yǎng)瓶內(nèi)加0.025%液0.5-1ml/瓶,水平左右搖動,便培養(yǎng)瓶底壁面*接觸消化酶,稍后用彎頭吸管吹打,待細(xì)胞*脫落后,加入3-5ml前培養(yǎng)終止消化。用吸管移入裝有培養(yǎng)液的離心管內(nèi)2000rpm10分鐘。棄上清液,留沉淀細(xì)胞; 
(4)低滲處理:給沉淀細(xì)胞加頂溫的37℃0.075MKCL8ml左右,用吸管打均勻,在溫箱中靜置20-30分鐘; 
(5)預(yù)固定:向低滲處理適當(dāng)?shù)碾x心管中加新鮮配制的3∶2甲醇,冰乙醇固定液1-2ml,用吸管輕松吹打調(diào)勻,此措施能起到使細(xì)胞表面輕微固定,可防止固定后細(xì)胞粘連成塊。 
(6)固定:800-1000rpm10分鐘,棄上清液加新鮮配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml,加入時要沿管壁慢慢加入,后輕輕吹打,封口后室溫靜置30分鐘以上,反復(fù)三次; 
(7)制片:末次離心后,倒掉上清液,留沉淀細(xì)胞,加新鮮配制固定液0.5ml左右,混勻后制片,其它同外周血方法。

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