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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門(mén)氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門(mén)氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

紫外線(xiàn)對(duì)枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的誘變效應(yīng)

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物理誘變因子中以紫外線(xiàn)輻射的使用zui為普通,其他物理誘變因子則受設(shè)備條件的限制,難以普及。一般用于誘變育種的物理因子有快中子、60Co、γ-射線(xiàn)和高能電子流β-射線(xiàn)等。紫外線(xiàn)作為物理誘變因子用于工業(yè)微生物菌種的誘變處理具有悠久的歷史,盡管幾十年來(lái)各種新的誘變劑不斷出現(xiàn)和被應(yīng)用于誘變育種,但到目前為止,對(duì)于經(jīng)誘變處理后得到的高單位抗生素產(chǎn)生菌種中,有80%左右是通過(guò)紫外線(xiàn)誘變后經(jīng)篩選而獲得的。因此,對(duì)于微生物菌種選育工作者來(lái)說(shuō),紫外線(xiàn)作為誘變因子還是應(yīng)該首先考慮的。
紫外線(xiàn)的波長(zhǎng)在200~380 nm 之間,但對(duì)誘變zui有效的波長(zhǎng)僅僅是在253~265 nm,一般紫外線(xiàn)殺菌燈所發(fā)射的紫外線(xiàn)大約有80%是254 nm。紫外線(xiàn)誘變的主要生物學(xué)效應(yīng)是由于DNA 變化而造成的,DNA 對(duì)紫外線(xiàn)有強(qiáng)烈的吸收作用,尤其是堿基中的嘧啶,它比嘌呤更為敏感。紫外線(xiàn)引起DNA 結(jié)構(gòu)變化的形式很多,如DNA 鏈的斷裂、堿基破壞。但其zui主要的作用是使同鏈DNA 的相鄰嘧啶間形成
胸腺嘧啶二聚體,阻礙堿基間的正常配對(duì),從而引起微生物突變或死亡。經(jīng)紫外線(xiàn)損傷的DNA,能被可見(jiàn)光復(fù)活,因此,經(jīng)誘變處理后的微生物菌種要避免長(zhǎng)波紫外線(xiàn)和
可見(jiàn)光的照射,故經(jīng)紫外線(xiàn)照射后樣品需用黑紙或黑布包裹。另外,照射處理后的孢子懸液不要貯放太久,以免突變?cè)诤诎抵行迯?fù)。
三、實(shí)驗(yàn)材料
(一) 菌種
枯草芽孢桿菌BF7658。
(二) 培養(yǎng)基(見(jiàn)附錄)
肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、淀粉培養(yǎng)基。
(三) 主要藥品
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、碘液。
(四) 主要器皿
試管、移液管、錐形瓶、量筒、燒杯、20 W 紫外燈、磁力攪拌器、離心機(jī)等。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
(一) 誘變
1. 菌懸液的制備
取已培養(yǎng)20 h 的活化枯草芽孢桿菌斜面一支,用10 mL 生理鹽水將菌苔洗下,并倒入盛有玻璃珠的錐形瓶中,強(qiáng)烈振蕩10 min,以打碎菌塊,離心(3000 r/min)15min,棄上清液,將菌體用無(wú)菌生理鹽水洗滌2 次,zui后制成菌懸液,用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度為108/mL。
2. 平板制作
將淀粉瓊脂培養(yǎng)基熔化后,冷至45℃左右倒平板。
3. 誘變處理
(1) 預(yù)熱 正式照射前開(kāi)啟紫外燈預(yù)熱10 min。
(2) 攪拌 取制備好的菌懸液4 mL 移入6 cm 的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,放入無(wú)菌磁力攪拌捧,置磁力攪拌器上,20 W 紫外燈下30 cm 處。
(3) 照射 然后打開(kāi)皿蓋邊攪拌邊照射,劑量分別為1 min,2 min,3 min。可以累積照射,也可分別照射不同時(shí)間。所有操作必須在紅燈下進(jìn)行。
4. 稀釋涂平板
在紅燈下分別取未照射的菌懸液(作為對(duì)照)和照射過(guò)的菌懸液各0.5 mL 進(jìn)行不同程度的稀釋。取zui后3 個(gè)稀釋度的稀釋液涂于淀粉培養(yǎng)基平板上,每個(gè)稀釋度涂3 個(gè)平板,每個(gè)平板加稀釋液0.1 mL,用無(wú)菌玻璃刮棒涂勻,37℃培養(yǎng)48 h(用黑布包好平板)。注意在每個(gè)平板背后要標(biāo)明處理時(shí)間、稀釋度、組別、座位號(hào)。
(二) 計(jì)篡存活率及致死率
1. 存活率
將培養(yǎng)48 h 后的平板取出進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。根據(jù)平板上菌落數(shù),計(jì)算出對(duì)照樣品1 mL 菌液中的活菌數(shù)。

同樣計(jì)算用紫外線(xiàn)處理1、2、3min 后的存活細(xì)胞數(shù)及致死率。

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