．實驗原理

聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction）簡稱PCR，它是一種DNA體外擴增技術。1985年美國的Mullis等人發(fā)明了PCR技術，在體外利用模板DNA 、特定的寡聚核苷酸引物和DNA聚合酶，通過DNA變性、復性和延伸過程合成一條互補的DNA鏈。反復重復這一過程，模板DNA就可得到大量擴增。在PCR過程中，DNA的延伸起初是用大腸桿菌的DNA聚合酶I（Klenow片段）來完成的。由于大腸桿菌的聚合酶不耐熱，每次加熱變性DNA后都要補加新的聚合酶。這不僅增加了實驗成本，而且當同時擴增多個樣品時極易出錯。在耐熱DNA聚合酶（Taq酶）發(fā)現后，才使PCR技術的廣泛應用成為可能。特別是自動熱循環(huán)儀（又叫DNA擴增儀）的發(fā)明，使PCR反應過程可以電腦控制，實現了自動化。PCR技術的發(fā)明雖然只有10多年的時間，但目前這一技術及其衍生的其他實驗技術在生物學的許多領域已得到了廣泛的應用。

隨機引物PCR（Arbitrary - primer PCR，縮寫為AP-PCR）又稱隨機擴增多態(tài)性DNA（Random amplified polimophic DNA，縮寫為RAPD），是Williams和Welsh等1990年在PCR的基礎上發(fā)展起來的一種實驗技術。在RAPD擴增中，僅用一個8-10堿基的寡核苷酸引物，引物的序列是隨機的。RAPD反應的條件與普通PCR基本相同。但由于引物較短，一般退火所需溫度較低。RAPD與普通PCR的另一個明顯的不同是前者不需知道模板DNA的序列，擴增出來的片段也是非特異性的；而后者則必須知道待擴增目的片段的序列，根據這一序列設計一對相應的引物。

RAPD技術一出現，便以它的簡便、快捷和多態(tài)性撿出率高而引起科學工作者的興趣。目前這一技術已被廣泛用于遺傳圖譜構建、群體遺傳結構分析、DNA指紋分析和基因定位等不同研究領域。

二．實驗步驟

（1）在0.5ml無菌離心管中依次加入下列溶液（在超凈臺上操作），加入后輕輕混勻。

無菌水 13μl

10×擴增緩沖液 2.5μl

4dNTPs溶液 1.5μl

引物 2.5μl

植物DNA（5ng/μl） 5μl

--------------------------- Taq DNA聚合酶 0.5μl

總體積 25μl

（2）加入100μl礦物油，遮蓋反應混合液的表面。

（3）將試管轉入DNA擴增儀，按下列條件進行擴增循環(huán)（需預先調節(jié)），共進行45個循環(huán)：

變性 復性 聚合反應

94°C ，1分 35°C，1分 72°C，2分

（4）循環(huán)完成后，在72°C再延伸6分鐘。

（5）將反應產物在1.4%瓊脂糖凝膠上電泳，紫外燈下觀察擴增的DNA條帶。