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技術(shù)文章
動(dòng)物氣管和支氣管假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
點(diǎn)擊次數(shù)：759 發(fā)布時(shí)間：2012-11-22
動(dòng)物氣管和支氣管假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 大鼠或兔的氣管和支氣管
2. 0.1%*或0.125%*和0.01%EDTA混合消化液
3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS（pH 7.4），含*100u/ml和*100μg/ml，pH7.4
4. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪，*
5. 一次性注射器（1ml或5ml）
6. 200目不銹鋼網(wǎng)篩
7. 離心管（15ml、50ml）
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 在無(wú)菌條件下取氣管或支氣管，用PBS反復(fù)沖洗，以除去血液和粘液。
2. 將氣管或支氣管的一端結(jié)扎，另一端插套管并固定。用注射器經(jīng)套管注入1%*，至氣管充盈為止。將氣管浸泡于PBS中，在37℃條件下消化20min。
3. 用注射器抽取培養(yǎng)液，將注射器插入套管，反復(fù)沖洗，以分離氣管上皮細(xì)胞。然后，將氣管或支氣管游離端的結(jié)扎線(xiàn)剪斷，回收管腔內(nèi)的細(xì)胞懸液。
4. 用200目不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾，將濾液離心（1000r/min，10min）。棄上清液后，再用培養(yǎng)液洗滌離心1次。
5. 用培養(yǎng)液懸浮沉淀細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至5×106 個(gè)/ml，接種于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板，放入37℃、5% CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。