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技術(shù)文章
質(zhì)粒的酵母直接轉(zhuǎn)化
點(diǎn)擊次數(shù)：675 發(fā)布時(shí)間：2012-11-30
質(zhì)粒的酵母直接轉(zhuǎn)化
[試劑]
PLATE 溶液：
40 ％聚乙二醇（ PEG ，分子量 3350 ； Sigma P 3640 ）
0.1mol/L 醋酸鋰
10 mmol/L Tris-HCl （ pH7.5 ）
1 mmol/L EDTA
[試驗(yàn)方法]
1． 用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑 2 ～ 3mm ），轉(zhuǎn)移到 1.5ml 的無(wú)菌離心管中。
2． 將 10 μ l 載體 DNA （ 100 μ g ）與 10 μ l 轉(zhuǎn)化質(zhì)粒 DNA 混合，振蕩均勻。（若轉(zhuǎn)化 DNA 是用未經(jīng) RNA 酶處理的“ mini － prep DNA ”方法制得，則不需加載體 DNA ）。
3． 加 0.5ml PLATE 溶液，振蕩。
4． 置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，室溫培養(yǎng) 4 天。
5． 置 42 ℃下熱激 15 分鐘。
6． 以 8000 ～ 10000r/min 離心 10 秒沉淀細(xì)胞 ，小心棄去上清液，將細(xì)胞 輕輕懸浮到 200 μ l 無(wú)菌蒸餾水，使細(xì)胞 懸浮均勻，再直接將混合液涂選擇平板。