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人類尿液中的腎上皮細胞研究
點擊次數(shù)：515 發(fā)布時間：2012-11-12
通過檢測細胞活力、培養(yǎng)基中的丙二醛（MDA）含量和細胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性的變化研究細胞損傷的程度;利用激光共聚焦顯微鏡觀察細胞損傷前后骨橋蛋白（OPN）表達水平的變化;采用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察細胞損傷前后形貌和膜表面微結(jié)構(gòu)的變化。采用過氧化氫（H2O2）對人類腎臟近端小管上皮細胞系（HKC）進行氧化損傷,建立損傷的細胞模型
廣州生物醫(yī)藥與健康研究院MiguelA.Esteban研究組和裴端卿研究組提出人類尿液中的腎上皮細胞是誘導(dǎo)多能干細胞（iPSCs）的理想來源之一。這一方法相比其他方法更簡單，重現(xiàn)性好，所產(chǎn)生的誘導(dǎo)多能干細胞表現(xiàn)出很好的分化能力。
研究人員表示由于分離尿液細胞非常的簡單，30ml尿液便已足夠，這一方法有利于大多數(shù)情況，符合成本效益，通用，適合于應(yīng)用各個年齡、性別和種族。此外，整個的程序相當(dāng)快速，iPSC克隆產(chǎn)率普遍較高可達4%。尿iPSCs（UiPSCs）也顯示出*的分化潛能，因此代表了生成來自正常個體或遺傳病患者多能細胞的一個*的選擇。
為了減輕患者不必要的痛苦，研究人員提出了分離尿細胞誘導(dǎo)生成iPSCs的方法。研究人員首先對57名個體進行了尿液樣本收集，從42名個體處成功獲得原代細胞培養(yǎng)物。之后，研究人員在分別進行了二、三及第四次嘗試，總體成功率達到近82%。隨后，采用10%的胎牛血清培養(yǎng)基將原始細胞進行培養(yǎng)促使其貼壁及存活。利用腎上皮細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)進行細胞擴增。細胞培養(yǎng)2-3周后，即可用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染方法將外源因子導(dǎo)入尿細胞中，重編程過程需3-4周，出現(xiàn)培養(yǎng)干細胞樣的克隆，再將這些克隆跳出來繼續(xù)培養(yǎng)，zui終可獲得穩(wěn)定的誘導(dǎo)多能干細胞。