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豬鏈球菌抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù)：441 發(fā)布時(shí)間：2013-7-29
豬鏈球菌抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：豬鏈球菌型抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱(chēng)：Porcine GDH Antibody Test Kit （ELISA）, GDH Ab
【包裝規(guī)格】
96×2測(cè)試/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中豬鏈球菌所有亞型的（GDH）IgG抗體。適用于豬場(chǎng)豬鏈球菌所有亞型疫苗免疫狀況的評(píng)價(jià)以及感染豬的血清學(xué)診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有豬鏈球菌基因重組抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的GDH-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+GDH-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與GDH-IgG的含量成正比，當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，表明免疫有效或有自然感染。
【主要組成成份】
1． | GDH抗原包被板 | 96T×2塊 |
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2． | 酶標(biāo)記物（黃蓋） | 22ml×1瓶 |
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3． | *（透明蓋） | 25ml×1瓶 |
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4． | 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） | 50ml×1瓶 |
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5． | GDH-IgG陰性對(duì)照血清（綠蓋） | 1.5ml×1瓶 |
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6． | GDH-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清（紅蓋） | 1.5ml×1瓶 |
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7． | 顯色劑A（紫蓋） | 12ml×1瓶 |
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8． | 顯色劑B（黃蓋） | 12ml×1瓶 |
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9． | 終止液（藍(lán)蓋） | 12ml×1瓶 |
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10． | 蓋板膜 | 6張 |
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11． | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
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不同批號(hào)的試劑組份不可混用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】
1．酶標(biāo)儀，單波長(zhǎng)450nm測(cè)量或雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)量。
2．ELISA用洗板機(jī)。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存不超過(guò)一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、*或*等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，需設(shè)空白對(duì)照1孔（不加任何液體）；雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，不設(shè)空白對(duì)照孔。設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl*，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會(huì)有變化）。
2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋?zhuān)┳M(mǎn)反應(yīng)板孔，洗滌5次，每次停留1分鐘，zui后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B各1滴（即50μl），振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘。
8．終止：每孔加終止液1滴（50μl），振蕩10秒，充分混勻。終止后5～30分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9．讀數(shù)：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)為450nm，以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）；雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，以450nm為主波長(zhǎng)、630nm為參比波長(zhǎng)，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做計(jì)算和判定。
10．結(jié)果判定：
臨界值（CO.）= 0.15。
樣本A值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為GDH-IgG陽(yáng)性； S/CO.＜1，判定為GDH-IgG陰性。
陰性對(duì)照血清A值應(yīng)小于0.10，陽(yáng)性對(duì)照血清A值應(yīng)大于0.70，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。注意：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則陰陽(yáng)性對(duì)照血清A值均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未感染也未免疫豬鏈球菌疫苗的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。仔豬因其體內(nèi)含有母源抗體，其測(cè)定A值常大于臨界值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。
2．因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。
3．陽(yáng)性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
GDH-IgG可作為評(píng)價(jià)豬鏈球菌疫苗免疫效果以及豬鏈球菌感染的血清學(xué)診斷指標(biāo)，但不能區(qū)別二者，若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床表現(xiàn)、免疫程序及其他診斷方法。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1．特異性 以本品檢測(cè)30份陰性參比血清不出假陽(yáng)性。
2．敏感性 以本品檢測(cè)30份陽(yáng)性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3．精密性 用精密性參比品測(cè)定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩(wěn)定性 試劑盒在2℃～8℃放置6個(gè)月或37℃放置3天，檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項(xiàng)】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，操作時(shí)需戴手套穿工作衣。
3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
7．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿(mǎn)而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。