·         采用常規(guī)消化傳代方式將0.25%*注入培養(yǎng)瓶內兩次，每次加1ml（25ml培養(yǎng)瓶），來回輕搖1-2次，使*流過所有細胞表面，然后倒掉。

·         蓋好瓶塞，將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)成纖維細胞變園，部分脫落，立即加入2ml有血清的培養(yǎng)基終止消化。

·         用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細胞生長區(qū)域（可事先在鏡下用記號筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號）。吹打時不要用力，也不要吹打上皮細胞生長區(qū)域。吹打結束后，再用少量培養(yǎng)基漂洗一遍，然后加入適量培養(yǎng)基于瓶內繼續(xù)培養(yǎng)，也可重復上述操作再進行一次。

·         隔幾日后或下次傳代時，再進行上述操作，進過幾次處理，就可將成纖維細胞去除或者將兩者分開。

原代培養(yǎng)時，如果上皮細胞和成纖維細胞分為區(qū)成混雜生長，每種細胞都以小片或區(qū)域性分布的方式生長在瓶壁上。可采用機械的方法去除不需要的細胞區(qū)域而保留需要的細胞區(qū)域，其方法步驟如下 ：

·         將要純化細胞的培養(yǎng)瓶，在凈化室內放在倒置顯微鏡監(jiān)視下進行操作。

·         用硅橡膠刮子在不需要生長的細胞區(qū)域推劃，使細胞懸浮在培養(yǎng)基中，注意不要傷及所需細胞。

·         推劃后用培養(yǎng)基沖洗振搖兩次倒掉，即可將培養(yǎng)基加入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

·         數(shù)日后如發(fā)現(xiàn)不需要的細胞又長出，可再進行上述操作，這樣反復多次可以純化細胞。操作過程中要嚴格無菌操作，防止污染。

·         將細胞懸液接種在一個培養(yǎng)內（培養(yǎng)基內不含血清，此時上皮細胞貼壁更慢）靜置20min。

·         在倒置顯微鏡下觀察，見部分細胞貼壁，稍加搖動也不浮起時，將細胞懸液導入另一培養(yǎng)瓶中。

·         繼續(xù)靜置培養(yǎng)20min，然后重復上述操作后，即可將上皮細胞和成纖維細胞分隔開，在*瓶和第二瓶以成纖維細胞為主，往后幾瓶即以上皮細胞為主，下次傳代時再按上述方法處理，就可使兩者達到*分開的目的。

·         倒去原液，并用記號筆劃出轉化灶的區(qū)域。

·         用加熱的微型電烙器（類似焊接用的電烙鐵）將轉化灶周邊的細胞全部燙死，只保留轉化灶細胞。在單細胞克隆篩選時，也可用此法將單個細胞周圍的細胞殺死。

·         然后在適應性培養(yǎng)基中（50%是原液）繼續(xù)培養(yǎng)，即可達到純化的目的。