·         采用常規(guī)消化傳代方式將0.25%*注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)兩次，每次加1ml（25ml培養(yǎng)瓶），來(lái)回輕搖1-2次，使*流過(guò)所有細(xì)胞表面，然后倒掉。

·         蓋好瓶塞，將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞變園，部分脫落，立即加入2ml有血清的培養(yǎng)基終止消化。

·         用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)區(qū)域（可事先在鏡下用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號(hào)）。吹打時(shí)不要用力，也不要吹打上皮細(xì)胞生長(zhǎng)區(qū)域。吹打結(jié)束后，再用少量培養(yǎng)基漂洗一遍，然后加入適量培養(yǎng)基于瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，也可重復(fù)上述操作再進(jìn)行一次。

·         隔幾日后或下次傳代時(shí)，再進(jìn)行上述操作，進(jìn)過(guò)幾次處理，就可將成纖維細(xì)胞去除或者將兩者分開(kāi)。

原代培養(yǎng)時(shí)，如果上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分為區(qū)成混雜生長(zhǎng)，每種細(xì)胞都以小片或區(qū)域性分布的方式生長(zhǎng)在瓶壁上?？刹捎脵C(jī)械的方法去除不需要的細(xì)胞區(qū)域而保留需要的細(xì)胞區(qū)域，其方法步驟如下 ：

·         將要純化細(xì)胞的培養(yǎng)瓶，在凈化室內(nèi)放在倒置顯微鏡監(jiān)視下進(jìn)行操作。

·         用硅橡膠刮子在不需要生長(zhǎng)的細(xì)胞區(qū)域推劃，使細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中，注意不要傷及所需細(xì)胞。

·         推劃后用培養(yǎng)基沖洗振搖兩次倒掉，即可將培養(yǎng)基加入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

·         數(shù)日后如發(fā)現(xiàn)不需要的細(xì)胞又長(zhǎng)出，可再進(jìn)行上述操作，這樣反復(fù)多次可以純化細(xì)胞。操作過(guò)程中要嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止污染。

·         將細(xì)胞懸液接種在一個(gè)培養(yǎng)內(nèi)（培養(yǎng)基內(nèi)不含血清，此時(shí)上皮細(xì)胞貼壁更慢）靜置20min。

·         在倒置顯微鏡下觀察，見(jiàn)部分細(xì)胞貼壁，稍加搖動(dòng)也不浮起時(shí)，將細(xì)胞懸液導(dǎo)入另一培養(yǎng)瓶中。

·         繼續(xù)靜置培養(yǎng)20min，然后重復(fù)上述操作后，即可將上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分隔開(kāi)，在*瓶和第二瓶以成纖維細(xì)胞為主，往后幾瓶即以上皮細(xì)胞為主，下次傳代時(shí)再按上述方法處理，就可使兩者達(dá)到*分開(kāi)的目的。

·         倒去原液，并用記號(hào)筆劃出轉(zhuǎn)化灶的區(qū)域。

·         用加熱的微型電烙器（類似焊接用的電烙鐵）將轉(zhuǎn)化灶周邊的細(xì)胞全部燙死，只保留轉(zhuǎn)化灶細(xì)胞。在單細(xì)胞克隆篩選時(shí)，也可用此法將單個(gè)細(xì)胞周圍的細(xì)胞殺死。

·         然后在適應(yīng)性培養(yǎng)基中（50%是原液）繼續(xù)培養(yǎng)，即可達(dá)到純化的目的。