細胞常見問題                                                 

1.血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？

基于多年的實驗研究，用于細胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物：：（1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達到1-2mm，可以用肉眼觀察到。因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當經(jīng)過zui后的過濾分裝后，就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。（3）*、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

2.血清中的沉淀物對細胞培養(yǎng)有什么影響？

（1）細胞生長，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。（2）過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產(chǎn)時zui后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴格的無菌檢測，因此不*再過濾用于細胞培養(yǎng)的血清。在實驗室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。（3）污染，磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。并且當研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時往往可以看到一些可以運動的小黑點，因此就更加確認是血清被污染了。于是，研究者就會花費更多的時間和精力來和生產(chǎn)商確認，但zui終確定血清沒有被污染而只是沉淀。為了避免這些問題的發(fā)生，我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進行培養(yǎng)以觀察是否有細菌生長。另外，也可以進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認是否有污染。

3.如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？

首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：（1）熱滅活血清；（2）在37℃下培養(yǎng)血清；（3）反復凍融；（4）γ射線照射；（5）*儲存在2-8℃；（6）在室溫下放置時間過長

4.如何去除血清中的沉淀？

如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。

5.冷凍管應(yīng)如何解凍？

取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。

6.細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？

除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。

7.一般客戶拿到細胞后，應(yīng)該注意什么？

客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。

收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

細胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制。

8.怎么樣確定細胞的質(zhì)量保障問題，能否開證明？能開什么樣的證明？如果細胞出現(xiàn)問題，客戶投訴，要求再發(fā)一株細胞，價格怎么算？

收到細胞48小時內(nèi)，細胞出現(xiàn)活力狀態(tài)問題（細胞活力狀態(tài)用臺盼藍染色法鑒定細胞活力），我們受理投訴；超過48小時不超過一星期，我們收取*次細胞全款的5折后，重新發(fā)放細胞。

9.快遞細胞多久能到，是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞？

我們采用快遞發(fā)貨，一般外地2--3天，寄細胞前請確認當?shù)販囟?，如果氣溫低?度的，則采用郵寄凍存細胞。

10.細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

（3）非*細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

（7）視具體情況而定。

請南京森貝伽生物科技有限公司，專業(yè)的，放心的服務(wù)。