抗體*,抗體用于免疫組化實驗，WB實驗，相應(yīng)的標(biāo)記抗體有HRP標(biāo)記抗體，F(xiàn)ITC標(biāo)記，BIO等。

【貯存條件】： 貯存于-20℃. 本品應(yīng)在低溫下保存，長時間在暴露在空氣中，含量會有所降低。

規(guī)格：0mg/50mg

材料和方法

　　. 材料 人成骨肉瘤MG63細(xì)胞為本實驗室保存。重組質(zhì)粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王巖教授惠贈。脂質(zhì)體 2000( Invitrogen公司)。高糖DMEM培養(yǎng)基(美國Gibco 公司)，胎牛血清(Hyclone公司)，和EDTA(Sigma 公司)。A2387，KN93，CaM，重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)。抗體：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒(邁晨科技有限公司)。

　　.2 蛋白印跡實驗 MG63細(xì)胞鋪于35 mmol/L培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞密度達(dá)到60%～70%時，轉(zhuǎn)染MycSSHL，48 h后換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)3 h，分別加入濃度為0.5，，2.5，5 μmol/L的A2387孵育0 min后裂解細(xì)胞，離心取上清加入凝膠加樣緩沖液,沸水浴上加熱5 min，上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交〔一抗分別為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。

　　.3 體外激酶測定 MycSSHL(WT)及其突變體MycSSHL(2 SA)分別轉(zhuǎn)染至MG63細(xì)胞，48 h后采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對照組為抗IgG抗體?；厥誐ycSSHL，加入0.6 μg/ml重組活性CaMKⅡ(單獨或同時加入抑制劑KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 于 20 μl 激酶反應(yīng)緩沖液中，30℃反應(yīng)40 min。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜，應(yīng)用放射自顯影技術(shù)檢測32P 標(biāo)記的SSHL水平。

　　.4 體外SSHL磷酸酶活性測定實驗 MycSSHL(WT)或MycSSHL (2 SA)轉(zhuǎn)染至MG63細(xì)胞，48 h后，采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對照組為抗IgG抗體。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨或同時加入抑制劑KN93)，20 μg/ml CaM，以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 于 20 μl 反應(yīng)緩沖液(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中30℃反應(yīng)2 h。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交(一抗分別為Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗體)、ECL顯色。

本公司更多產(chǎn)品優(yōu)惠:

鼠抗人白細(xì)胞特異性單克隆抗體    Leukocyte Specific Protein       小鼠生長激素釋放多肽GHRP抗體    毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體
342    鼠抗人單克隆抗體    Linker for Activation of T cells        小鼠腎損傷分子Kim-抗體     鈣離子ATP酶通道蛋白抗體
343    鼠抗人腔上皮抗原單克隆抗體    Luminal Epithelial Ag        小鼠腎素Renin抗體    活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體
344    鼠抗人肺癌耐藥蛋白單克隆抗體    Lung Cancer Resistance Protein (LRP)       小鼠腎上腺髓質(zhì)素ADM抗體     氫鉀ATP酶通道蛋白抗體
345    鼠抗單克隆抗體    Luteinizing Hormone(LH)        小鼠腎上腺素能aA受體ADRAA抗體     ATP合成酶H+轉(zhuǎn)運線粒體F0復(fù)合體亞基F6抗體
346    兔抗人溶菌素多克隆抗體    Lysozyme       小鼠腎上腺素EPI抗體    銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)α鏈抗體
347    兔抗人多克隆抗體    Lysozyme（Muramidase）        小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4NT-4抗體    吸引素抗體
348    鼠抗人肥大細(xì)胞類單克隆抗體    Mast Cell Tryptase     小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3NT-3抗體    銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)β鏈抗體
349    鼠抗人基質(zhì)金屬蛋白酶單克隆抗體    Matrix Metalroteinase       小鼠神經(jīng)肽YNP-Y抗體    鈉鉀ATP酶通道蛋白抗體