| GB/T 21916-2008水果罐頭中合成著色劑高效液相色譜法 1 范圍 本標準規(guī)定了水果罐頭中檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、紅、亮藍、赤蘚紅人工合成著色劑的高效液相色譜測定方法 本標準適用于水果罐頭中檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、紅、亮藍、赤蘚紅人工合成著色劑的測定 本標準檢出限為檸檬黃0.300mg/kg、莧菜紅0.300mg/kg、靛藍0.300mg/kg、胭脂紅0.300mg/kg、日落黃0.150mg/kg、紅0.150mg/kg、亮藍0.100mg/kg、赤蘚紅0.150mg/kg 2 原理 水果罐頭中的人工合成著色劑用乙醇-氨水提取，利用固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜-紫外檢測器，外標法定量 3 試劑和材料 3.1 水：去離子水貨相當純度的水 3.2 甲醇：色譜純 3.3 無水乙醇：分析純 3.4 氨水：分析純 3.5 鹽酸：分析純 3.6 乙酸銨溶液（0.02mol/l）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解，定容至1000ml，經(jīng)0.45um過濾器過濾 3.7 無水乙醇-氨水溶液：量取無水乙醇80ml，氨水1ml，加水定容至100ml，混勻 3.8 PH8D 50%甲醇溶液：量取甲醇50ml，加水定容至100ml，混勻，加氨水調(diào)PH值8 3.9 PH8的水：水加氨水調(diào)PH值到8 3.10 2%氨水：量取氨水2ml，加水定容至100ml，混勻 3.11 鹽酸-乙醇溶液（1+9）：量取10ml鹽酸、90ml乙醇，混勻 3.12 50%甲醇溶液：量取甲醇50ml，加水定容至100Ml，混勻 3.13 固相萃取柱或相當者：Sep-Pak Plus QMA360mg，顆粒度37um-55um，臨用前依次加5ml甲醇（3.2）和5ml水預處理，保持柱體濕潤 3.14 合成著色劑標準貯備液：準確稱取按其純度折算為99%質(zhì)量的檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、紅、亮藍、赤蘚紅各0.0500g，置100ml容量瓶中，加水至刻度，配置成500ug/ml標準儲備液 3.15 合成著色劑標準使用液：臨用時將標準儲備液加水稀釋成20ug/ml的標準中間液，再將該中間液稀釋成0.100,0.200,0.400,1.00,3.00,5.00ug/ml的標準系列溶液，經(jīng)0.45um過濾器過濾 4 儀器 4.1 501高效液相色譜儀，配有紫外檢測器，色譜工作站 4.2 分析天平：感量0.1mg 4.3 勻漿機 4.4 快速混勻器 4.5 離心機：3000r/min 4.6 恒溫水浴 4.7 0.45um水性樣品過濾器 4.8 固相萃取裝置 5 樣品制備 5.1 提取 將整份試樣用勻漿機打碎，再攪拌均勻，準確稱取2.00g左右樣品（精確至0.01g），裝入離心管中，加10Ml無水乙醇-氨水溶液，渦旋0.5min，再3000r/min離心10Min將上清液倒入塞有脫脂棉的玻璃漏斗中過濾，將剩余殘渣再重復操作三次，將收集的濾液（約40ml）置于80℃水浴中濃縮至約2ml，為試樣溶液 5.2 凈化 將濃縮后的試樣溶液用2%的氨水調(diào)成PH8后，轉(zhuǎn)移到預處理過的固相萃取中，依次用3MlPH8的水喝3MlPH8的50%甲醇以小于2ml/min的流速清洗，棄去全部流出液，再用10ml鹽酸-乙醇溶液（1+9）將著色劑洗脫出固相萃取柱，手機洗脫液，用氨水中和80℃水浴濃縮至盡干，冷卻后用50%的甲醇溶液溶解并定容至10Ml，經(jīng)0.45um濾膜過濾后，進行高效液相色譜測定 6 測定 6.1 液相色譜條件 6.1.1 色譜柱：美國VertexC18色譜柱，4.6mm×250mm,5um 6.1.2 流動相：甲醇-乙酸銨溶液（0.02ml/l） 6.1.3 梯度洗脫：梯度洗脫條件見下表 時間/min 流速（ml/min） 甲醇% 乙酸銨溶液% 0 1.0 20 80 5 1.0 35 65 10 1.0 80 20 16 1.0 80 20 17 1.0 20 80 25 1.0 20 80 6.1.4 進樣量：10ul 6.1.5 檢測器：UV501紫外可見光檢測器選擇檸檬黃428nm、莧菜紅521nm、靛藍608nm、胭脂紅509nm、日落黃483nm、紅507nm、亮藍625nm、赤蘚紅529nm波長測定 6.2 測定 根據(jù)保留時間定性，外表峰面積法定量 八種合成著色劑標準品 7 結(jié)果計算 X=c×V×1000/m×1000 X-試樣中被測組分的含量，單位為毫克每千克（mg/kg） c-由標準曲線得到的試樣溶液中被測組分的含量，單位為微克每毫升（ug/ml） V-試樣溶液定容體積，單位為毫升（ml） m-試樣質(zhì)量，單位為克（g） 計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字 8 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定的結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的10% | 
