| 大鼠INS ELISA KiT 【產(chǎn)品編號(hào)】： EIA06235
使用前*閱讀說(shuō)明書(shū)。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，能測(cè)量大鼠INS，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。 【工作原理】
Insulin，胰島素。胰島素由A、B兩個(gè)肽鏈組成。胰島素（Insulin Human）A鏈有11種21個(gè)氨基酸，B鏈有15種30個(gè)氨基酸，共16種51個(gè)氨基酸組成。其中A7（Cys）-B7（Cys）、A20（Cys）-B19（Cys）四個(gè)半*中的巰基形成兩個(gè)二硫鍵，使A、B兩鏈連接起來(lái)。此外A鏈中A6（Cys）與A11（Cys）之間也存在一個(gè)二硫鍵。胰島素是一種蛋白質(zhì)類(lèi)激素,體內(nèi)胰島素是由胰島β細(xì)胞分泌的。在胰腺中散布著許許多多的細(xì)胞群，叫做胰島。胰島素是由胰島β細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、*、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)*（biotin）標(biāo)記。樣品和*標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過(guò)PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。
【每套試劑盒中內(nèi)容】（96T） 材料 數(shù)量
大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品 96T（2vial）
預(yù)包被大鼠INS抗體的96孔板 96T（8×12）
*標(biāo)記大鼠INS抗體 96T （1:100）
ABC（親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物） 96T （1:100）
樣品稀釋液 96T×2
大鼠INS抗體稀釋液 96T×1
ABC稀釋液 96T×1
TMB顯色液A 96T×1
TMB顯色液B 96T×1
TMB終止液 96T×1
ELISA洗滌液 96T×1（1:25） 【需要而未提供的試劑和器材】
1． 37℃恒溫箱。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3． 自動(dòng)洗板機(jī)。
4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendof管。 【注意事項(xiàng)】
1. 從-20℃取出的試劑盒，在4℃解凍過(guò)夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開(kāi)啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時(shí)出現(xiàn)的分層，否則會(huì)出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2. 開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時(shí)，切記混勻！
4. 用戶(hù)在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
5. 建議所有大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
6. 要嚴(yán)格避免操作過(guò)程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活！
7. 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。 【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將*的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。 【樣品的準(zhǔn)備和保存】
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時(shí)或4℃過(guò)夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。 【樣品稀釋的一般原則】
用戶(hù)須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測(cè)因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測(cè)范圍。樣品的稀釋?xiě)?yīng)有詳細(xì)記錄。 【試劑的準(zhǔn)備和保存】
A. 大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，*溶解后做倍比稀釋。
稀釋后的大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品在2小時(shí)內(nèi)使用。 B．*標(biāo)記大鼠INS抗體工作液：在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量（實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul*標(biāo)記大鼠INS抗體加大鼠INS抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。 C．親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準(zhǔn)備：在使用前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量（實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。 D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。 【操作程序】
1． 確定本次檢測(cè)所需的已包被大鼠INS抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2． 將倍比稀釋的大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4． 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5． 將準(zhǔn)備好的*大鼠INS抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過(guò)程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見(jiàn)大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時(shí)，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長(zhǎng)不要超過(guò)30分鐘）。
10． 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶(hù)也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。 【操作程序總結(jié)】：
準(zhǔn)備試劑，樣品和大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品 加入準(zhǔn)備好的樣品和大鼠INS標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)90分鐘 洗板2次，加入*化大鼠INS抗體工作液，37℃反應(yīng)60分鐘 洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘 洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應(yīng) 加入TMB終止液 30分鐘之內(nèi)讀OD值 計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量
【檢測(cè)范圍】：100mIU/L→1.56mIU/L。
【敏感性】： ＜0.5mIU/L
【特異性】： 系統(tǒng)和其它因子無(wú)交叉反應(yīng)。
【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]
【有效期】： 12個(gè)月（-20℃）。
【用途】： 用于體外定量分析液體標(biāo)本（通用型）。
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