革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫(yī)生漢斯•克里斯蒂安•革蘭（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所發(fā)明，zui初是用來(lái)鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。未經(jīng)染色之細(xì)菌，由于其與周?chē)h(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察 陽(yáng)性紫色陰性紅色。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類(lèi)鑒定。
革蘭氏染色原理
        通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類(lèi)脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類(lèi)脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
革蘭氏染色步驟
       革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。
3）自來(lái)水沖洗。
4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃紅染色液（稀）染2分鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。
染色結(jié)果
         革蘭氏陽(yáng)性菌都呈紫色，革蘭氏陰性菌都呈紅色。