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外周血培養(yǎng)基的配制

2012年07月25日 11:11:30人氣:1029來源:上海滬宇生物科技有限公司

外周血培養(yǎng)基配制: 

 一、配制用水

 

  培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的

 

  雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

 

  二、培養(yǎng)基

 

  培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2~7.4,若pH值超

 

  過7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。

 

  三、血清

 

  培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含

 

  量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。

 

  四、抗菌素

 

  為防止培養(yǎng)時期細(xì)菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素,一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同:*100單位/毫升,或雙抗--*100單位/

 

  毫升,*100微克/毫升。

 

  五、植物血凝素(PHA)

 

  非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細(xì)胞,但在離體培養(yǎng)過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進入有絲分裂。

 

  經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時和68—72小時。

 

  PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細(xì)胞均

 

  被激活為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。

 

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