環(huán)保在線APP
環(huán)保在線手機站
環(huán)保在線小程序
微信公眾號
上海都宜生物科技有限公司作者
磷酸鈣法轉(zhuǎn)染HEK293T細胞
一.試劑配制
無菌水ddw： 高溫滅菌； 分裝；
2XHBS： 280mM NaCl
10mM KCl
1.5 mM Na2HPO4
12 mM glucose
50 mM HEPES
Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 過濾滅菌，分裝；
2M CaCl2： 過濾滅菌，分裝。
二. 實驗過程：
1. 鋪細胞： 選擇狀態(tài)良好的293T細胞傳代， 2-3x105個細胞/35mm dish。
2. 20-24h后，待細胞長至鋪滿瓶底約50-70%的時候，進行轉(zhuǎn)染。下面就35mm dish為例，采用以下轉(zhuǎn)染體系：
ddw： 105ul
plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul）
2M CaCl2： 16.5ul
2XHBS： 125ul
按上述順序，往eppendorf管中依次加入上述四種試劑。
先將前三者混勻， zui后加2XHBS。
一種方法是，加2XHBS時要逐滴加入， 吹打至微現(xiàn)乳白色， 立即均勻滴入培養(yǎng)皿，輕輕搖勻后置于培養(yǎng)箱中，6-8h后換液。
另一種方法是， 加入2XHBS后立即吹打約40下（不過這個要根據(jù)每個人的力道和吹打的頻率而定， 建議做一個梯度實驗，吹打不同的次數(shù)看哪次的轉(zhuǎn)染效率高以后就按這個次數(shù)來吹打）， 之后步驟同上， 立即均勻滴入培養(yǎng)皿，輕輕搖勻后置于培養(yǎng)箱中，6-8h后換液。
關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱
全年征稿/資訊合作
聯(lián)系郵箱：hbzhan@vip.qq.com
- 版權(quán)與免責(zé)聲明
- 1、凡本網(wǎng)注明"來源：環(huán)保在線"的所有作品，版權(quán)均屬于環(huán)保在線，轉(zhuǎn)載請必須注明環(huán)保在線，http://www.kytsldc.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。
- 2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容，如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的，一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任，本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。
- 3、本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點或證實其內(nèi)容的真實性，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品來源，并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 4、如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)直播推薦更多>>
產(chǎn)品推薦更多>>
-
-
全自動烘干箱 膠片沖洗片機 小型便攜式 烘干除濕設(shè)備
型號：ZCHG-160 -
-
NPW150總磷/總氮在線分析儀工業(yè)廢水 總磷/總氮在線檢測儀
型號：NPW150總磷/總氮在線分析儀工業(yè)廢水 總磷/總氮在線檢測儀 -
型號：ZCHG-80 -
射線檢測暗室設(shè)備 膠片烘干箱 干燥箱 烘干除濕設(shè)備
型號：ZCHG-80
環(huán)保在線官微
環(huán)保在線APP
環(huán)保在線小程序