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弓形蟲(chóng)病實(shí)驗(yàn)室診斷與結(jié)果分析

2010年10月13日 17:07:32人氣:1112來(lái)源:上海酶聯(lián)生物研究所

弓形蟲(chóng)?。╰oxoplasma)是由剛地弓形蟲(chóng)引起的人畜共患的傳染病,具有廣泛的自然疫源性,很多哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)均可罹患此病。弓形蟲(chóng)侵襲人體可導(dǎo)致弓形蟲(chóng)感染和弓形蟲(chóng)病,后者專(zhuān)指有臨床表現(xiàn)和活動(dòng)性感染的病理學(xué)改變。人體弓形蟲(chóng)感染多為隱性感染,但抵抗力低下時(shí),則可出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀。先天性感染常致胎兒畸形、死胎及流產(chǎn)。
[病因?qū)W] 弓形蟲(chóng)生活史包括有性生殖和無(wú)性生殖2個(gè)階段,全過(guò)程需兩種宿主——終末宿主(貓及貓科動(dòng)物)和中間宿主(其他動(dòng)物或人體內(nèi))。弓形蟲(chóng)發(fā)育全過(guò)程有5種不同形態(tài):即滋養(yǎng)體、包囊、裂殖體、配子體和卵囊。
貓食人弓形體卵囊或包囊后,在腸腔分別釋放出子孢子和滋養(yǎng)體,并侵入小腸上皮細(xì)胞進(jìn)行裂體增殖,部分裂殖子發(fā)育為雌雄配子體,兩者結(jié)合為合子,發(fā)育為卵囊,隨貓糞排出體外。
人食人弓形體卵囊或吞食包囊后,在腸內(nèi)逸出子孢子、緩殖子或速殖子,隨即侵入腸壁經(jīng)血或淋巴進(jìn)入單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)寄生,并擴(kuò)散至全身各器官組織的實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)繁殖,導(dǎo)致細(xì)胞破裂,引起各種急性病癥。在免疫功能正常的機(jī)體,部分速殖子侵入宿主細(xì)胞后,特別是腦、眼、骨骼肌的蟲(chóng)體繁殖速度減慢,并形成包囊,包囊在宿主體內(nèi)可存活數(shù)月、數(shù)年,甚至終身不等。當(dāng)機(jī)體免疫功能低下或長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制藥時(shí),組織內(nèi)的包囊可破裂,釋出緩殖子,進(jìn)入血流和其他新的組織細(xì)胞繼續(xù)發(fā)育繁殖。
速殖子期是弓形蟲(chóng)的主要致病階段,以其對(duì)宿主細(xì)胞的侵襲力和在有核細(xì)胞內(nèi)*的內(nèi)二芽殖法增殖破壞宿主細(xì)胞。蟲(chóng)體逸出后又重新侵入新的細(xì)胞,刺激淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn),導(dǎo)致組織的急性炎癥和壞死。
包囊內(nèi)緩殖于是引起慢性感染的主要形式,包囊因緩殖子增殖而體積增大,擠壓器官,使功能受到障礙。包囊增大到一定程度,可因多種因素而破裂。游離的蟲(chóng)體可刺激機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng),并形成肉芽腫病變,后期的纖維鈣化灶多見(jiàn)于腦、眼部等。宿主感染弓形蟲(chóng)后,在正常情況下,可產(chǎn)生有效的保護(hù)性免疫,多數(shù)無(wú)明顯癥狀,當(dāng)宿主有免疫缺陷或免疫功能低下時(shí)才引起弓形蟲(chóng)病,即使在隱性感染,也可導(dǎo)致復(fù)發(fā)或致死的播散性感染;近幾年有報(bào)道艾滋病患者因患弓形蟲(chóng)腦炎而致死。
[實(shí)驗(yàn)室診斷]
特異性檢查
(1)涂片檢查。
(2)動(dòng)物接種分離法。
(3)血清學(xué)檢查。
(4)分子生物學(xué)診斷。
[結(jié)果分析與判斷]
1.涂片檢查 取急性期患者的體液、腦脊液、血液、骨髓、羊水、胸水經(jīng)離心后,沉淀物作涂片,或采用活組織穿刺物涂片,經(jīng)姬姆薩染色后,顯微鏡下檢查出弓形蟲(chóng)滋養(yǎng)體即可確診。此法簡(jiǎn)便,但陽(yáng)性率不高、易漏檢。此外也可切片用免疫酶或熒光染色法,觀(guān)察特異性反應(yīng),可提高蟲(chóng)體的檢出率。
2.動(dòng)物接種分離法 動(dòng)物接種分離法或細(xì)胞培養(yǎng)法查找滋養(yǎng)體。采用敏感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小白鼠,樣本接種于腹腔內(nèi),1周后剖殺取腹腔液顯微鏡檢查,陰性需盲目傳代至少3次;樣本亦可接種于離體培養(yǎng)的單層有核細(xì)胞。動(dòng)物接種和細(xì)胞培養(yǎng)是目前常用的病原查診方法。
3.血清學(xué)檢查 由于弓形蟲(chóng)病原學(xué)檢查存在不足,血清學(xué)檢查成為廣泛應(yīng)用的診斷手段。方法種類(lèi)較多,主要有以下4種。
(1)染色試驗(yàn):為經(jīng)典的特異血清學(xué)方法,采用活滋養(yǎng)體在有致活因子的參與下與樣本內(nèi)特異性抗體作用,使蟲(chóng)體表膜破壞不為著色劑美藍(lán)所染。顯微鏡檢查見(jiàn)蟲(chóng)體不被藍(lán)染者為陽(yáng)性,蟲(chóng)體多數(shù)被藍(lán)染者為陰性。
(2)IHA:此法特異、靈敏、簡(jiǎn)易,適用于流行病學(xué)調(diào)查及篩查性抗體檢測(cè),應(yīng)用廣泛。
(3)間接免疫熒光抗體試驗(yàn):以整蟲(chóng)為抗原,采用熒光標(biāo)記的第2抗體檢測(cè)特異抗體。此法可測(cè)同型及亞型抗體,其中檢測(cè)IgM適用于臨床早期診斷。
(4)ELISA:用于檢測(cè)宿主的特異循環(huán)抗體或抗原,已有多種改良法廣泛用于早期急性感染和先天性弓形蟲(chóng)病的診查,這種方法的靈敏度可檢出抗原量為0.5ug/L
4.分子生物學(xué)診斷 近年來(lái)將PCR及DNA探針技術(shù)應(yīng)用于檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染,更具有靈敏、特異、早期診斷的意義,目前已開(kāi)始試用于臨床。
 

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