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液相色譜柱的使用及維護(hù)

2019年07月15日 15:45:46人氣:1938來(lái)源:南京科捷檢測(cè)科技發(fā)展有限公司

  色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,稍有不慎就會(huì)降低柱效,縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中,需要注意下列問(wèn)題,以維護(hù)色譜柱。
 
  1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
 
  2、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)該直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?br /> 
  3、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去柱內(nèi)的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
 
  4、選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞,有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠,預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
 
  5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱骨需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
 
  6、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),在進(jìn)行清洗時(shí),對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡,每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50-75ml。
 
  7、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。
 
  8、色譜柱使用過(guò)程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,使體積增大。
 
  通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料,只能在pH2-9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后,可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂。新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降。每次工作完后,用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí),使用網(wǎng)后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道,不宜長(zhǎng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4-5天開機(jī)沖洗15分鐘。
 
  柱的保養(yǎng):
 
  1、當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí),閥件或管路一定要清洗干凈;
 
  2、要注意流動(dòng)相的脫氣;
 
  3、避免使用高沾度的溶劑作為流動(dòng)相;
 
  4、進(jìn)樣樣品要提純;
 
  5、嚴(yán)格控制進(jìn)樣量;
 
  6、每天分析工作結(jié)束后,要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品;
 
  7、每天分析測(cè)定結(jié)束后,都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱;
 
  8、若分析柱長(zhǎng)期不使用,應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉;
關(guān)鍵詞:色譜柱 色譜儀
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