快速細胞破碎法實驗步驟

1、 挑取轉(zhuǎn)化平板上的單菌接種于含相應(yīng)抗生素的2ml LB中，37℃振蕩培養(yǎng)至A590值為0.6～0.8。

2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm離心9min，去盡上清。

3、 加入70μl Cracking Gel緩沖液[1mol/L Tris –HCl（pH6.8）10ml,20%SDS 10ml, 250mmol/L EDTA 1.6ml,蔗糖27.2g, 1.2%溴酚藍1.67ml，加雙蒸水至200ml]，混勻后，37℃水浴30min以上。

4、 15000rpm離心15min。

5、 吸取上清點樣電泳，觀察。

轉(zhuǎn)化子DNA的酶切鑒定

轉(zhuǎn)化子DNA的快速少量抽提

1） 菌液移至5ml Eppendorf 管中，9000rpm,離心9min，去上清。

2） 加溶液Ⅰ100μl，溶液Ⅱ200μl，溶液Ⅲ150μl，混勻，冰浴10min。

3） 15000rpm離心15min。

4） 吸取上清，加入異丙醇1ml混勻，置室溫15～30min。

5） 15000rpm離心15min，棄上清，加入75%乙醇洗滌2次。

6） 離心棄上清，真空抽干，加入適量1×TE溶解DNA。

7） 取少量DNA電泳，觀察濃度。