IHC實驗抗原修復(fù)的質(zhì)量控制

【資料簡介】

正面臨標(biāo)準(zhǔn)化、量化的挑戰(zhàn)。例如腫瘤各種預(yù)后標(biāo)記物的IHC檢測結(jié)果的評估，越來越需要進(jìn)行表達(dá)間差異的定量分析，對腫瘤病人預(yù)后作出客觀、準(zhǔn)確的判定。欲實現(xiàn)這一目標(biāo)，必須對IHC的每一步進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，才能保證對IHC的質(zhì)量控制。作者認(rèn)為，在整個IHC過程中，目前zui大的困難是IHC的抗原修復(fù)，也是影響IHCzui終結(jié)果的zui不穩(wěn)定因素，各個實驗室都有自己*的方法，遠(yuǎn)沒有達(dá)到初步的共識。欲實現(xiàn)IHC的質(zhì)量控制，必須對AR進(jìn)行質(zhì)量控制，可以考慮從如下幾個方面進(jìn)行。

首先，要想獲得一個滿意、可靠的IHC抗原修復(fù)的結(jié)果，必須對獲得結(jié)果的可靠性作出準(zhǔn)確的評估，同時為證實結(jié)果是否可靠，必須結(jié)合該抗體的生物學(xué)特征，檢查標(biāo)本的臨床資料，以及其他實驗獲得的結(jié)果，例如Western印跡、ISH等分子生物學(xué)方法和各種對照結(jié)果進(jìn)行分析比較，制定一個合理、科學(xué)的抗原修復(fù)方法。

其次，每個從事IHC工作的人員（包括技術(shù)員和醫(yī)生）要了解被檢測抗原在組織細(xì)胞內(nèi)的定位，這一點(diǎn)是很重要的，據(jù)此不但可以明確IHC染色結(jié)果是否可靠，而且可以調(diào)整抗原修復(fù)的方法和力度。許多的開拓性研究對蛋白質(zhì)的定位是一種很重要的依據(jù)，可以根據(jù)形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、生物學(xué)性質(zhì)和其他相關(guān)領(lǐng)域的知識來確定定位的準(zhǔn)確性。為了達(dá)到上述目的，對所檢測抗原性質(zhì)的了解也很重要，例如活細(xì)胞系、新鮮組織和甲醛固定的石蠟包埋的細(xì)胞和組織的可比系統(tǒng)，再加上所掌握的蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性，就可以獲得比較的定位，據(jù)此判斷經(jīng)抗原修復(fù)后其蛋白質(zhì)定位的可靠性和真實性。

IHC的定位，不但對于臨床病理的輔助診斷、腫瘤預(yù)后的評估和指導(dǎo)治療具有十分重要的作用，而且對于科學(xué)研究也相當(dāng)重要。zui近有些應(yīng)該出現(xiàn)在核內(nèi)表達(dá)的抗原，在有些檢測結(jié)果中頻繁出現(xiàn)在細(xì)胞漿內(nèi)，例如p73、p16、p21war、p33lNGl、存活蛋白（sur—vivin）和細(xì)胞周期素等，根據(jù)實驗室經(jīng)驗和所掌握的這些抗原的生物學(xué)特征，首先應(yīng)該考慮是否是抗原修復(fù)這一環(huán)節(jié)出了問題，其次是否是抗體的質(zhì)量有問題。

根據(jù)各自抗體的生物學(xué)特點(diǎn)不同，在檢測甲醛固定的石蠟切片時，應(yīng)該制定一個*的抗原修復(fù)方案，具體原則如下：

①、首先要明確不是所有的抗原檢測都需用抗原修復(fù)；

②、不是所有的由甲醛固定引起的抗原結(jié)構(gòu)改變都適合于常規(guī)AR，應(yīng)該在調(diào)查研究的前提下制定一個*的抗原修復(fù)流程；

③、對于少量蛋白，用高溫（煮沸）不能檢測到IHC陽性結(jié)果，可采用較低溫度的熱處理，或與其他抗原暴露的方法相結(jié)合，例如熱修復(fù)和酶消化、熱修復(fù)和細(xì)胞穿透劑、兩種不同的修復(fù)介質(zhì)或與高敏感的IHC方法相結(jié)合，以獲得*的染色結(jié)果。

原文地址:/biotech/Immunity/2011/g818582732