羊布魯氏菌病酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

【資料簡介】

羊布魯氏菌病（Brucellosis）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測定羊血清、血漿及相關液體樣本中布魯氏菌?。˙rucellosis）的含量。
實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中羊布魯氏菌?。˙rucellosis）水平。用純化的羊布魯氏菌?。˙rucellosis）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的標準品和未知濃度的待檢樣品，溫育后，加入*標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的布魯氏菌?。˙rucellosis）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中羊布魯氏菌?。˙rucellosis）濃度。 
羊布魯氏菌?。˙rucellosis）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒組成 

標本要求 
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
操作步驟
1.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中加入50微升樣本，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。
5.加*標記的抗-IgG抗體：每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6.洗滌：操作同4。
7.加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8.洗滌：操作同4。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：羊布魯氏菌?。˙rucellosis）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算
  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
4．如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
線性范圍：
10pg/ml-240pg/ml
規(guī)格：
96人份/盒
羊布魯氏菌病（Brucellosis）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月