單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒技術(shù)參數(shù)

【資料簡(jiǎn)介】

單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒說明書
測(cè)定意義：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥。

測(cè)定原理：

MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛，進(jìn)一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測(cè)定360nm光吸收下降的速率，計(jì)算MAO活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體60mL×2瓶，4℃保存。

試劑二：液體2mL×1管，4℃避光保存。

粗酶液提?。?/p>

稱取約0.1g樣品，加1 mL預(yù)冷的提取液一充分冰浴勻漿，1000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，50000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1mL 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定）。

測(cè)定操作表：

分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至360nm，對(duì)照管調(diào)零。
操作表
 

對(duì)照管

測(cè)定管

酶液（µL）

 

20

試劑一（µL）

180

160

試劑二（µL）

20

20

混勻，對(duì)照管調(diào)零，測(cè)定360nm處吸光值A(chǔ)1，然后37℃水浴60min，對(duì)照管調(diào)零，測(cè)定360nm處吸光值A(chǔ)2。ΔA=A1-A2

MAO活性計(jì)算公式：

1、按蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（U/ mg prot）= ΔA÷1.46÷60×10÷Cpr = ΔA÷8.76÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

DAO活性（U/ g）=ΔA÷1.46÷60×10÷W = ΔA÷8.76÷W

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、吸光度變化應(yīng)該控制在0.05～0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定，可選用考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。