禽白血病病毒抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 使用說明書.

【資料簡介】

【產(chǎn)品名稱】

通用名：禽白血病病毒抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Poultry Avian leukosis virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預期用途】禽白血病是由禽白血病病毒（Poultry Avian leukosis virus ，ALV）引起的能在禽類中導致不同致病型的腫瘤性疾病,能使大多數(shù)感染雞的生產(chǎn)性能下降,本病呈世界性分布，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。

    本試劑盒適用于：禽血清抗原的檢測，以確定被檢禽是否感染禽白血病毒。

【原理】

本試劑盒由預包被禽白血病病毒抗體的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測禽血清或血漿中禽白血病病毒抗原。實驗時，在酶標板中加入對照血清和待檢血清，再加入HRP標記的檢測抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽白血病病毒抗原，則將與酶標板上抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后；在孔中加底物液TMB，與酶標結(jié)合物反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗原含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽白血病病毒。

【試劑盒組成】

序號	名稱	規(guī)格/96T×1
1	微孔酶標板	96孔
2	陰性對照	0.3mL
3	陽性對照	0.3mL
4	樣本稀釋液	6mL
5	檢測抗體-HRP	10mL
6	20×洗滌緩沖液	25mL
7	底物A	6mL
8	底物B	6mL
9	終止液	6mL
10	封板膜	2張
11	說明書	1份
12	自封袋	1個
13	微孔酶標板	96孔

 

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.

 

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔加入待測樣本50μL，空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，于450nm波長處測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.2，陽性對照≥0.8。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.25+陰性對照孔均值。

2.陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對照OD值+0.15，樣本OD值大于閾值，判定為陽性，反之，為陰性。

【試驗方法的局限性】

該試驗僅作為定性檢測血清或血漿中禽白血病病毒。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復至室溫方可開袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

7.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

9.不同批號試劑組分不得混用。