現(xiàn)貨人核轉(zhuǎn)錄因子ELISA 檢測試劑盒的試驗原理

【資料簡介】

人核轉(zhuǎn)錄因子ELISA 檢測試劑盒 

　　　　　　　　　　　　本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：組織勻漿

試驗原理：
NF-κB試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知NF-κB濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將NF-κB和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中NF-κB的濃度呈比例關(guān)系。


自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

人核轉(zhuǎn)錄因子ELISA 檢測試劑盒 

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

人核轉(zhuǎn)錄因子ELISA 檢測試劑盒 
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的NF-κB標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的NF-κB含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-8.0umol/L

4、敏感度： 0.01 umol/L

人核轉(zhuǎn)錄因子ELISA 檢測試劑盒 

DA2487-0.2mlNeurofascin-155 神經(jīng)束蛋白-1550.2ml
DA2488-0.2mlNT（Neurotensin） 神經(jīng)降壓素抗體0.2ml
DA2489-0.2mlNF2/merlin（neurofibromatosis type 2） 2型神經(jīng)纖維瘤抗體0.2ml
DA2490-0.2mlNFATc1 活化T細(xì)胞核因子1蛋白0.2ml
DA2491-0.2mlNFBD1/MDC1（Nuclear factor with BRCT domains protein 1） DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體0.2ml
DA2492-0.1mlNF-H（Neurofilament triplet H） 高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體0.1ml
DAR1137-0.1mlMouse anti-goat IgM/APC 熒光素APC標(biāo)記小鼠抗羊IgM0.1ml
DAR1138-0.1mlMouse anti-human IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記小鼠抗人IgG0.1ml
DAR1139-0.1mlMouse anti-rabbit IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記小鼠抗兔IgG0.1ml
DAR1140-0.1mlMouse anti-rat IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記小鼠抗大鼠IgG0.1ml
DAR1141-0.1mlMouse anti-rat IgM/APC 熒光素APC標(biāo)記小鼠抗大鼠IgM0.1ml
DA2492-0.2mlNF-H（Neurofilament triplet H） 高分子量神經(jīng)絲蛋白抗體0.2ml
DA2493-0.1mlNFKBp65（p65 NF-kappa B;p65NFKB） 細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體0.1ml