士鋒生物實驗動物采血實用技術(shù)

【資料簡介】

采血方法的選擇，決定于實驗的目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細血管的血。當需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復多次，應(yīng)自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。例如，研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、動脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及 K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動脈血液。 采血時要注意：⑴采血場所有充足的光線；室溫夏季保持在25-28℃，冬季，15-20℃為宜；⑵采血用具有采用部位一般需要進行消毒；⑶采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預先加入抗凝劑.
不同動物采血部位與采血量的關(guān)系
采血量 采血部位 動物品種 動物品種 zui大安全采血量（ml） zui小致死采血量（ml）
小 鼠 0.2 0.3
大 鼠 1 2
豚 鼠 5 10
兔 10 40
狼 狗 100 500
獵 狗 50 200
猴 15 60
　
取少量血 尾靜脈 耳靜脈 眼底靜脈叢 舌下靜脈 腹壁靜脈 冠、腳蹼皮下靜脈 大鼠、小鼠 兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊 兔、大鼠、小鼠 兔 青蛙、蟾蜍 雞、鴨、鵝
取中量血 后肢外側(cè)皮下小隱靜脈前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈 耳動脈 頸靜脈 心臟 斷頭 翼下靜脈 頸動脈 狗、猴、貓 狗、猴、貓 兔 狗、貓、兔 豚鼠、大鼠、小鼠 大鼠、小鼠 雞、鴨、鴿、鵝 雞、鴨、鴿、鵝
取大量血 股動脈、頸動脈 心臟 頸靜脈 摘眼球 狗、猴、貓、兔 狗、猴、貓、兔 馬、牛、山羊、綿羊 大鼠、小鼠

（一）小鼠、大鼠采血法
1.割（剪）尾采血 當所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀）割去尾尖0.3-0.5cm，讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。
2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多時（僅做白細胞計數(shù)或血紅蛋白檢查），可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7號或8號注射針頭，刺入鼠尾靜脈，拔出針頭時即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果反復取血，應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐漸向近心端穿刺。
3.眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（大鼠采血需帶上紗手套），應(yīng)防止動物窒息。當取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號針頭的1ml注射器或長頸（3～4cm）硬質(zhì)玻璃滴管（毛細管內(nèi)徑0.5-1.0mm），使與鼠面成45℃的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對著眼眶后界。刺入濃度，小鼠約2～3mm，大鼠約4～5mm。當感到有阻力時即停止推進，同時，將針退出約0.1-0.5mm，邊退邊抽。若穿刺適當血液能自然流入毛細管中，當?shù)玫剿璧难亢?，即除去加于頸部的壓力，同時，將拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。 若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml；體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可適用于某些生物化學項目的檢驗。
4.斷頭取血 采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大（?。┦蟮念i部皮膚，并作動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.8～1.2ml;大鼠約5-10ml。
5.心臟采血 鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故少用?；铙w采血方法與豚鼠相同。若做開胸一次死亡采血，先將動物作深麻醉，打開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml；大鼠約0.8-1.2ml。
6.頸動靜脈采血 先將動物仰位固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露，可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。
7.腹主動脈采血 先將動物麻醉，仰臥固定在手術(shù)架上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使腹主動脈清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血?；蛴脽o齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動脈近心端，用尖頭刀，剪斷動脈，使血液噴入盛器。
8.股動（靜）脈采血 先由助手握住動物，采血者左手拉直動物下肢，使靜脈充盈。或者以搏動為指標，右手用注射器刺入血管。體重15-20g 小鼠采血約0.2-0.8ml，大鼠約0.4-0.6ml。

（二）豚鼠采血法
1.耳緣剪口采血 將耳消毒后，用銳器（刀或刀片）割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液，阻止血凝，則血可自切口自動流出，進入盛器。操作時，使耳充血效果較好。此法能采血0.5ml左右。
2.心臟采血 取血前應(yīng)探明心臟搏動zui強部位，通常在胸骨左緣的正中，選心跳zui顯的部位作穿刺。針頭宜稍細長些，以免發(fā)生手術(shù)后穿刺孔出血，其操作手法詳見兔心臟采血。因豚鼠身體較小，一般可不必將動物固定在解剖臺上，而可由助手握住前后肢進行采血即可。成年豚鼠每周采血應(yīng)不超過10ml為宜。
3.肌動脈采血 將動脈仰位固定在上，剪去腹股溝區(qū)的毛，麻醉后，局部用碘酒消毒。切開長約2-3cm的皮膚，使股動脈暴露及分離。然后，用鑷子提起股動脈，遠端結(jié)扎，近端用夾住，在動脈剪一小孔，用無菌玻璃小導管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入，放開，血液即導管口流出。一次可采血10-20ml。
4.背中足靜脈取血 助手固定動物，將其右或左右膝關(guān)節(jié)伸直提到術(shù)者面前。術(shù)者將動物腳背面用酒精消毒，找出背中足靜脈后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射針刺入靜脈。拔針后立即出血，呈半球狀隆起。采血后，用紗布或脫脂棉壓迫止血。反復采血時，兩后肢交替使用。

（三）兔采血法
1.耳靜脈采血 本法為zui常用的取血法之一，常作多次反復取血用，因此，保護耳緣靜脈，防止發(fā)生栓塞特別重要。 將兔放入僅露出頭部及兩耳的固定盒中，或由助手以手扶住。選耳靜脈清晰的耳朵，將耳靜脈部位的毛拔去，用75%酒精局部消毒，待干。用手指輕輕摩擦兔耳，使靜脈擴張，用連有5（1/2）號針頭的注射器在耳緣靜脈末端刺破血管待血液漏出取血或?qū)⑨橆^逆血流方向刺入耳緣靜脈取血，取血完畢用棉球壓迫止血，此種采血法一次zui多可采血5-10ml。