士鋒生物血細(xì)胞的分離

【資料簡(jiǎn)介】

血細(xì)胞由紅細(xì)胞,白細(xì)胞,血小板等組成.實(shí)驗(yàn)中常用白細(xì)胞來(lái)做研究,如炎癥滲出,細(xì)胞遷移,識(shí)別等都涉及到白細(xì)胞.白細(xì)胞又分為:粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞等.它們具有不同的功能.實(shí)驗(yàn)中常需要分離血細(xì)胞方能進(jìn)行。

這里主要論述人外周白細(xì)胞的分離，主要是中性粒細(xì)胞（Neutrophil），淋巴細(xì)胞（Lymphocyte），單核細(xì)胞（Monocyte）的分離。其它骨髓，脾淋巴細(xì)胞等分離可參，不同種屬間請(qǐng)注意分離液的選擇。

細(xì)胞分離中需要注意的幾個(gè)問(wèn)題

1.如果您要做細(xì)胞培養(yǎng)，記住實(shí)驗(yàn)中所用的試劑（分離液，洗滌液等）、器械等都要是無(wú)菌消毒的，并注意實(shí)驗(yàn)中的無(wú)菌操作。

2. 離心轉(zhuǎn)速單位及時(shí)間：目前國(guó)外的文獻(xiàn)報(bào)道基本上用g為單位，注意g和轉(zhuǎn)速（rpm）的換算。

3.離心溫度：有的要求室溫，有的要求4攝氏度。實(shí)驗(yàn)的操作要求盡可能熟練，連貫。

4.在用Ficoll分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）時(shí)，通常含有少量的紅細(xì)胞，對(duì)于一般的實(shí)驗(yàn)影響不大，如果實(shí)驗(yàn)要求較高，可采取裂解液（有的需要無(wú)菌），并注意裂解時(shí)間控制，以免影響單個(gè)核細(xì)胞的活性。

5. 在用Percoll配不連續(xù)梯度時(shí)（一般用高滲NaCl），注意各成份體積的準(zhǔn)確性，否則密度與預(yù)期的不一樣，影響分離效果。

6.用全血離心效果比全血稀釋后再離心效果差，稀釋一般等體積稀釋一倍。

7.分離液與樣本的體積比：一般應(yīng)小于1：2（即一般為1體積分離液，2體積樣本，不宜超過(guò)2體積，小于2體積均可）

8.洗滌液的成分：不同文獻(xiàn)報(bào)道不一，有的使用PBS，有的為Hank’s，KRP等，可自己選定。主要是離子濃度及成份的不同，有的含有Mg2+,Ca2+。

9. 細(xì)胞活性：0.2%臺(tái)盼藍(lán)染色3－5分鐘，鏡下觀察計(jì)數(shù)死亡細(xì)胞（藍(lán)染）。