植物磷脂酶D（Phospholipase D）說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

主要用途

 植物磷脂酶D（Phospholipase D）總水解活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)磷脂酶D、脂酶、甘油-3-磷酸氧化酶和過(guò)氧化酶酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的紅色產(chǎn)物醌亞胺染料，在分光光度儀下峰值的增高， 即采用比色法來(lái)測(cè)定植物組織裂解樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）、上胚軸（epicotyl）等裂解萃取樣品中磷脂酶D的總水解活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

磷脂酶（phospholipase），是一種脂質(zhì)水解酶，催化磷脂的水解，產(chǎn)生脂肪酸和其它親脂產(chǎn)物，參與磷脂代謝。磷脂酶家屬有四種類型亞酶，包括A、B、C和D。磷脂酶A（phospholipase A；PLA）主要水解磷脂sn-1（磷脂酶A1催化）和sn-2（磷脂酶A2催化）位置上的乙?；?；磷脂酶B（phospholipase B；PLB）同時(shí)水解磷脂的sn-1和sn-2位置上的乙?；?，又稱為溶血磷脂酶（lysophospholipase）；磷脂酶C（phospholipase C；PLC）在磷酸基前水解，釋放二酰基甘油（diacylglycerol；DAG）和第二信使分子三磷酸肌醇（inositol triphosphate）；磷脂酶D（phospholipase D；PLD；EC3.1.4.4）在磷酸基后水解，釋放磷脂酸（phosphatidic acid）。植物磷脂酶D，屬于異源性酶（heterogeneous enzyme）家屬成員，與哺乳動(dòng)物磷脂酶D不同，有6個(gè)異構(gòu)體：α、β、γ、δ、ε和ζ：PLDα是磷脂酰肌醇4,5二磷酸（phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate；PIP2）-非依賴性的zui常見(jiàn)的植物PLD酶，而PLDβ和PLDγ是磷酸磷脂酰肌醇輔因子（polyphosphoinositide cofactor）依賴性；PLDγ在氨基酸序列同源性和生化特性上類似于PLDβ；PLDδ為膜相關(guān)性，游離油酸（oleic acid）可以激活。PLD通過(guò)催化磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine；PC）、磷脂酰甘油（phosphatidylglycerol；PG）、磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine；PS）和磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine；PE）上磷酸二酯鍵（phosphodiester）的水解，產(chǎn)生磷脂酸和游離頭端基團(tuán)（free head group）；磷脂酸作為信號(hào)分子，進(jìn)一步水解為二?；视停c跨膜信號(hào)功能、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)質(zhì)膜的降解和重構(gòu)等有關(guān)。同時(shí)通過(guò)轉(zhuǎn)移磷脂基團(tuán)到原生醇類的羥基上的磷脂轉(zhuǎn)移活性（transphosphatidylation）。PLD及其催化產(chǎn)物參與了植物組織對(duì)于環(huán)境應(yīng)急反應(yīng)，例如創(chuàng)傷、寒冷、干旱缺水、鹽化高滲透壓等。基于底物磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺，在磷脂酰肌醇4,5二磷酸和油酸的輔助下，通過(guò)磷脂酶D的作用，水解產(chǎn)生為磷脂酸和各種基團(tuán)后，通過(guò)脂酶（lipase）、甘油-3-磷酸氧化酶（glycerol-3-phosphate oxidase）和過(guò)氧化酶（peroxidase）系統(tǒng)，測(cè)定紅色產(chǎn)物醌亞胺染料（quinoneimine dye）的峰值變化（500nm 波長(zhǎng)），來(lái)定量分析磷脂酶D的總水解活性。磷脂酶D連續(xù)循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)為：