細胞樣本的前處理

【資料簡介】

一、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細胞樣本的前處理:

1、細胞沉淀的收集：

① 懸浮細胞: 對于懸浮培養(yǎng)的細胞，直接通過離心收集細胞沉淀，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉淀。

② 貼壁細胞: 對于貼壁培養(yǎng)的細胞，用*將細胞消化下來，或用細胞刮將細胞刮下來，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉淀。

我們一般建議客戶，細胞密度不要小于一百萬個/ml。

2、細胞沉淀的洗滌：

在細胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS （等滲）， 輕輕顛倒混勻，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉淀。

重復上述操作反復洗滌1～2次。

3、勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反復凍融。

① 手工勻漿：在細胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動勻漿3分鐘，然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。

② 超聲破碎:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進行如下操作:

     a、用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復3～5次。

      b、用超聲細胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑，zui厲害，基本可以把細胞*破掉，DNA會釋放出來，裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40，也是常用的細胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方面有一定作用（SDS基本會使蛋白變性失活）。

去垢劑屬性只是一方面，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不*用裂解液進行裂解。

④ 反復凍融:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復3次左右）。

                由于反復凍融對酶活力影響較大,一般不*使用

產(chǎn)品：

鼠抗*r重鏈單克隆抗體，mAb-IgGr抗體價格	【產(chǎn)品貨號】:KAT0036 【來源】:鼠 【指標】:克隆號：4E5 RA<1ug/mL; 純度>90%      【用途】:ELISA、WB、 膠金、膠乳比濁 【狀態(tài)】:凍干 【規(guī)格】:1mg/瓶
E0101-5|羊抗AFP血清IgG價格	類別:純化一抗IgG 性狀:凍干品 規(guī)格:1mg(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:E0101-5
Anti-HSF 1抗體|AbM52020-3-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM52020-3-PU 【濃度】:1㎎/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Ce 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:
D0509|孕酮單抗價格	類別:單克隆抗體 性狀:溶液 規(guī)格:1mg(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:D0509
Taq-Plus PCR Master Mix價格	【英文】Taq-Plus PCR Master Mix 【貨號】EG15117 【規(guī)格】2ml(其他規(guī)格可來電索取) 【制品說明】Taq‐Plus PCR Master Mix 是 2 倍濃度的 Taq‐Plus DNA 聚合酶 (Cat. No. EG15109)、reaction buffer、MgCl2 和 dNTPs 的預混液，已經(jīng)針對一般 PCR 反應進行了優(yōu)化。對于 50 微升反 應體系，僅需要將 DNA 模板和引物與 25 微升 Taq‐Plus PCR Master Mix 混合，然后添加 ddH2O 至 50 微升。? 【用途】用于 TA 克隆、PCR 鑒定、菌落 PCR 鑒定等快速擴增。 【活性定義】在 72℃條件下，30 分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，將 10nmol脫氧核苷酸摻入到酸不容物質(zhì)所需的酶量定義為 1 個活性單位 (U)。?
*測試盒價格	【產(chǎn)品編號】ECCH-100 【儲存】-20 °C 【運輸】干冰 【測試】100T
Anti-MGB抗體|AbM51022-12-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51022-12-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:5.69×109
Y0003,HBV全陰血清價格	類別:陰性、陽性及參考血清 貨號:Y0003 性狀:溶液 規(guī)格:100ml 滴度(RIA法):
乙醇(化學法)測試盒價格	【產(chǎn)品編號】DIET-500 【儲存】4 °C 【運輸】常溫 【測試】500T
Anti-Protein MSS1抗體|AbM51070-15-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51070-15-PU 【濃度】:1㎎/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Ce 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:
H0611-4,驢抗羊IgG血清價格	類別:抗免疫球蛋白血清（二抗血清） 貨號:H0611-4 性狀:凍干品或溶液 規(guī)格:1ml 滴度(RIA法):
前列腺抗原|TPSA價格	類別:腫瘤標記物質(zhì)控品 英文名:TPSA 靶值/濃度:<1 ng/ml 體積:0.5ml/支
梅毒螺旋體抗體|TP價格	類別:傳 染 病 質(zhì) 控 品 英文名:TP 靶值/濃度:弱陽 體積:0.5 ml/支
禽流感病毒通用型(AIV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒
食品中亞硝酸鹽檢測盒價格	規(guī)格:100次/盒 檢測樣本: 產(chǎn)品有效期:12個月(我司產(chǎn)品均為批次，可放心購買)
天冬氨酸檢測試劑盒價格	【產(chǎn)品編號】EASP-100 【儲存】-20 °C 【運輸】干冰 【測試】100T
D0202|T3單抗單克隆抗體價格	類別:單克隆抗體 性狀:溶液 規(guī)格:1mg(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:D0202
胎牛血清透析|GIBCO原裝|26400-036價格	【品牌】GIBCO原裝 【規(guī)格】500ml（其他規(guī)格請來電索?。?br>【貨號】26400-036
新西蘭小牛血清|GIBCO原裝|16010-159價格	【品牌】GIBCO原裝 【規(guī)格】500ml（其他規(guī)格請來電索?。?br>【貨號】16010-159
人胱抑素Ｃ，CysC抗體價格	【產(chǎn)品貨號】:KAY0001 【來源】:人 【指標】:純度>96% 【用途】:免疫原、參考品 【狀態(tài)】:凍干 【規(guī)格】:100ug/瓶         1mg/瓶
Anti-MAWBP(PBLD)抗體|AbM51007-1-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51007-1-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:WB-Ce 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:1.23×109
Anti-CREM抗體|AbM52001-22-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM52001-22-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:1.54×109
Anti-GSTO1抗體|AbM51033-21-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51033-21-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re 【亞類】:IgG2b 【親和常數(shù)(1/mol)】:8.73×108
山羊血清|標準山羊血清價格	【規(guī)格】100ml(其他規(guī)格請來電索取) 【用途】診斷試劑生產(chǎn)，醫(yī)學研究等，不用于臨床診斷
鉻離子檢測試劑盒價格	【產(chǎn)品編號】DCRM-250 【儲存】4, -20°C 【運輸】常溫 【測試】250T
人糖化血紅蛋白，HbA1c抗體價格	【產(chǎn)品貨號】:KAY0025 【來源】:人 【指標】:純度>99% 【用途】:免疫原、參考品 【狀態(tài)】:凍干 【規(guī)格】:100ug/瓶 1mg/瓶 5mg/瓶
食品中鉛檢測盒價格	規(guī)格:50次/盒 檢測樣本:水果、蔬菜、皮蛋 產(chǎn)品有效期:12個月(我司產(chǎn)品均為批次，可放心購買)
熒光素酶報告基因測試盒價格	【產(chǎn)品編號】SLLU-200 【儲存】-20 °C 【運輸】常溫 【測試】200T
F0800,兔血清價格	類別:正常血清及血漿 貨號:F0800 性狀:溶液 規(guī)格:100ml 滴度(RIA法):
羊抗*M多克隆抗體，gAb-IgM抗體價格	【產(chǎn)品貨號】:KAT0015.1 【來源】:羊 【指標】:BT<1mg/mL 純度>90% 【用途】:ELISA、WB、 免疫比濁 【狀態(tài)】:凍干 【規(guī)格】:1mg/瓶 15mg/瓶 50mg/瓶
Anti-ACTB抗體|AbM51046-1-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51046-1-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Ce 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:2.19×109
J0611-7|HRP-兔抗羊IgG血清IgG價格	類別:酶標記二抗IgG 性狀:凍干品或溶液 規(guī)格:0.1ml(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:J0611-7
新生牛血清|標準新生牛血清價格	【規(guī)格】100ml(其他規(guī)格請來電索取) 【用途】獸用疫苗，診斷試劑生產(chǎn)及普通原代傳代細胞培養(yǎng)等，不用于臨床診斷
一氧化氮合成酶價格	【產(chǎn)品編號】ENOS-100 【儲存】-20 °C 【運輸】干冰 【測試】100T
面粉及面制品中溴酸鉀檢測盒價格	規(guī)格:50次/盒 檢測樣本:面粉及面制品 產(chǎn)品有效期:12個月(我司產(chǎn)品均為批次，可放心購買)
豬瘟病毒（CSFV）核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒 【目的】本試劑盒適用于檢測病豬的血液、淋巴結(jié)、心、肺、腎、脾、膀朧、膽囊等臟器組織的豬瘟病毒(CSFV)RNA，適用于豬瘟病毒(CSFV)感染的輔助診斷及流行病學調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。 【原理】本試劑盒用一對豬瘟病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術對豬瘟病毒RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
L-苯*價格	【產(chǎn)品編號】EPHE-100 【儲存】-20 °C 【運輸】干冰 【測試】100T
C0507-5,羊抗睪酮血清價格	類別:抗血清（一抗免疫血清） 貨號:C0507-5 性狀:凍干品 規(guī)格:1.0ml 滴度(RIA法):1∶1.0×104
Anti-A1AT抗體|AbM51053-9-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51053-9-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:3.15×109
β-葡萄糖苷酶測試盒價格	【產(chǎn)品編號】DBGD-100 【儲存】-20 °C 【運輸】常溫 【測試】100T
胎牛血清標準型澳大利亞|Hyclone原裝|30370.03價格	【品牌】Hyclone原裝 【規(guī)格】500ml（其他規(guī)格請來電索取） 【貨號】30370.03
肺炎衣原體(CP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒
H1111-6,羊抗豬IgG血清價格	類別:抗免疫球蛋白血清（二抗血清） 貨號:H1111-6 性狀:凍干品或溶液 規(guī)格:1ml 滴度(RIA法):
Anti-PRDX5抗體|AbM51044-8-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51044-8-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:3.66×109
牛奶中蔗糖檢測盒價格	規(guī)格:40次/盒 檢測樣本:牛奶 產(chǎn)品有效期:12個月(我司產(chǎn)品均為批次，可放心購買)
G1000-k|昆明小鼠血清IgG價格	類別:純化正常血清免疫球蛋白 性狀:凍干品或溶液 規(guī)格:1mg(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:G1000-k
C0301-7,兔抗HSA血清價格	類別:抗血清（一抗免疫血清） 貨號:C0301-7 性狀:凍干品 規(guī)格:1.0ml 滴度(RIA法):1∶1.5×103
孔雀石綠快速檢測試紙價格	規(guī)格:30次/盒 檢測限:2ppb 檢測樣本:組織 產(chǎn)品有效期:12個月(我司產(chǎn)品均為批次，可放心訂購)
乙型肝炎病毒核心抗體|HBcAb價格	類別:傳 染 病 質(zhì) 控 品 英文名:HBcAb 靶值/濃度:弱陽 體積:0.5 ml/支
小反芻獸疫病毒（PPR）核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒 【目的】  反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒(Peste des petits ruminants virus，PPRV)引起的一種嚴重的傳染病，主要感染小反芻動物，特別是山羊高度易感。該病毒是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒屬(Morbolivirus)的成員，同屬的其他成員還有牛瘟病毒(Rinderpest virus，RPV)、犬瘟熱病毒(Canine distemper virus，CDV)、海豹瘟病毒(Porpoise distemper virus，PDV)等。PPRV主要侵害淋巴組織及消化道上皮組織，以突然發(fā)熱、眼鼻排出分泌物、口腔潰瘍、呼吸失調(diào)、咳嗽、惡臭的腹瀉和死亡為特征。本病1942年報告發(fā)生于西非之象ya海岸，1972年正式確認病原為反芻獸疫，PPRV有4個群，但只有1個血清型。該病于1942年在非洲的科特迪瓦發(fā)生，近幾年該病在我國的周邊國家頻頻發(fā)生，特別是今年在我國西藏發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)已嚴重威脅到我國小反芻動物的健康。本試劑盒適用于檢測山羊、綿羊、美國白尾鹿等小反芻動物的血液、淋巴結(jié)、扁桃體、肺、腦、心、肝、脾、腎等臟器組織，以及其它可見病變的組織的小反芻獸疫病毒(PPR)RNA，適用于小反芻獸疫病毒(PPR)感染的輔助診斷及流行病學調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。 【原理】本試劑盒用一對小反芻獸疫病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術對小反芻獸疫病毒RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
傳染性皮下和造血器官壞死病病毒（IHHNV）核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒 【目的】本試劑盒適用于檢測對蝦胃、鰓、卵巢等組織，卵以及各期幼體等標本傳染性皮下和造血器官壞死病病毒（IHHNV）DNA，用于對蝦傳染性皮下和造血器官壞死病的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。  【原理】本試劑盒用傳染性皮下和造血器官壞死病病毒特異性引物結(jié)合特異性探針，用熒光PCR技術對傳染性皮下和造血器官壞死病病毒核酸進行體外擴增檢測，用于上對可疑感染者的病原學診斷。
呼吸道腺病毒(ADV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒
B0107|CA15-3部分純化抗原價格	類別:部分純化抗原 (配制免疫分析標準品) 性狀:凍干粉 規(guī)格:50KU(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:B0107
*GSH|GSSG測試盒價格	【產(chǎn)品編號】EGTT-100 【儲存】-20 °C 【運輸】干冰 【測試】100T
高低密度脂(HDL|LDL|VLDL)測試盒價格	【產(chǎn)品編號】E2HL-100 【儲存】-20 °C 【運輸】干冰 【測試】100T
噬肺軍團桿菌(LP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒
雞蛋新鮮度檢測盒價格	規(guī)格:10次/盒 檢測樣本:雞蛋 產(chǎn)品有效期:12個月(我司產(chǎn)品均為批次，可放心購買)
白喉桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒
Anti-GOT2抗體|AbM51058-13-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51058-13-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re,WB-Ce 【亞類】:IgG2b 【親和常數(shù)(1/mol)】:7.19×108
Anti-G1|S-specific cyclin-D1抗體|AbM51095-19-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM51095-19-PU 【濃度】:1㎎/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re 【亞類】:IgG2b 【親和常數(shù)(1/mol)】:
anti-PON 1抗體|AbM53006-15-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM53006-15-PU 【濃度】:1㎎/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB-Re,WB-Ce 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:8.04×109
甲型流感病毒H1N1亞型(IAV-H1N1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)價格	【包裝】48T 【分類】PCR-熒光試劑盒 【目的】本試劑盒適用于檢測疑似感染者*等標本中甲型流感病毒H1N1亞型RNA，用于甲型流感病毒H1N1亞型感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。 【原理】本試劑盒用一對甲型流感病毒H1N1亞型特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用一步法熒光RT-PCR技術對甲型流感病毒H1N1亞型RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
E0102-7|兔抗CEA血清IgG價格	類別:純化一抗IgG 性狀:凍干品 規(guī)格:1mg(其他規(guī)格請來電索取) 貨號:E0102-7
Anti-Trx Tag抗體|AbM59002-2-PU抗體價格	【產(chǎn)品編號】:AbM59002-2-PU 【濃度】:1mg/ml 【宿主】:小鼠 【規(guī)格】:100ul/管 【應用】:Elisa,WB 【亞類】:IgG1 【親和常數(shù)(1/mol)】:4.39×109