現(xiàn)貨菠蘿蛋白酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒半價使用說明書

【資料簡介】

本試劑盒僅供研討運(yùn)用。
檢查規(guī)模：96T
2 IU/L -48 IU/L
運(yùn)用意圖：
本試劑盒用于測定植物安排，細(xì)胞及其它有關(guān)樣本中菠蘿蛋白酶（Bromelain）含量。
實(shí)驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中菠蘿蛋白酶（Bromelain）水平。用純化的菠蘿蛋白酶（Bromelain）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次參加菠蘿蛋白酶（Bromelain），再與HRP符號的菠蘿蛋白酶（Bromelain）抗體，構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成終究的。色彩的深淺和樣品中的菠蘿蛋白酶（Bromelain）呈正有關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過規(guī)范曲線核算樣品中菠蘿蛋白酶（Bromelain）濃度。
試劑盒構(gòu)成

標(biāo)本請求 
1．標(biāo)本收集后盡早進(jìn)行獲取，獲取按有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，獲取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能立刻進(jìn)行實(shí)驗，可將標(biāo)本放于-20℃保留，但應(yīng)防止重復(fù)凍融
2．不能檢查含NaN3的樣品，因NaN3按捺辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作過程
1. 規(guī)范品的稀釋：本試劑盒提供原倍規(guī)范品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：別離設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、規(guī)范孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上規(guī)范品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗刷：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔參加酶標(biāo)試劑50μl，空白孔在外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗刷：操作同5。
9. 顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：

核算
  以規(guī)范物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出規(guī)范曲線，依據(jù)樣品的OD值由規(guī)范曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用規(guī)范物的濃度與OD值核算出規(guī)范曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，核算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保留。
2．濃洗刷液也許會有結(jié)晶分出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響成果。
3．各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其準(zhǔn)確性，以防止實(shí)驗誤差。一次加樣時刻控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，引薦運(yùn)用排槍加樣。
4． 請每次測定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于規(guī)范品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時請zui終乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性運(yùn)用，以防止穿插污染。
6．底物請避光保留。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗成果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保留條件及有效期
1．試劑盒保留：；2-8℃。
2．有效期：6個月