細(xì)胞/組織高質(zhì)純化溶酶體分離試劑盒

【資料簡(jiǎn)介】

主要用途

細(xì)胞/組織高質(zhì)純化溶酶體（lysosome）分離試劑是一種旨在從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出活性完整而高度純化的溶酶體細(xì)胞器的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和培養(yǎng)細(xì)胞的溶酶體的制備。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能穩(wěn)定，分離產(chǎn)量和純度俱佳。

技術(shù)背景

溶酶體（lysosome）是一種普遍存在于真核細(xì)胞中的細(xì)胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各種細(xì)胞殘?jiān)蛷U棄物質(zhì)，包括過多的或破損的其它細(xì)胞器、食物顆粒、吞噬的細(xì)菌和病毒等。其大小為0.5至1.5微米，球圓形，溶酶體內(nèi)pH為5.0左右。溶酶體功能異常會(huì)引起溶酶體貯積癥（1ysosomal storage disorders；LSDs），例如家族性

?。═ay-sachs disease）和龐貝氏癥 （Pompe’s disease）。溶酶體細(xì)胞器的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的zui常用的手段之一。從任何組織或細(xì)胞分離溶酶體的技術(shù)方法基本上采用：*，通過機(jī)械或化學(xué)方法破裂細(xì)胞；第二，通過低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞器；第三，通過高速差速離心獲得溶酶體；甚至，第四，可以通過等密度離心獲得純度更高的溶酶體。 

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（12028）或PBS緩沖溶液（12033）：用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細(xì)胞脫離
*細(xì)胞培養(yǎng)液（12052）：用于細(xì)胞處理所需的培養(yǎng)基
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
6毫升超速離心管：用于超高速離心的容器
4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞
4℃超速離心機(jī)：用于分離細(xì)胞器成分
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為10次（1克動(dòng)物組織或 108細(xì)胞）操作
2．所有操作均須嚴(yán)格在4℃或以下狀態(tài)進(jìn)行
3．操作時(shí)，須戴手套
4．操作時(shí)，須無菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）、分離液（Reagent E）和高純液系列
5．建議使用足夠的樣品量
6．建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間
7．通常勻化次數(shù)為40至80下（或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達(dá)到80％的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度：完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加勻化次數(shù)
8．通常孵育5分鐘（不宜超過5分鐘）達(dá)到80％的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織或細(xì)胞類型會(huì)存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細(xì)胞裂解程度：完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)
9．對(duì)于難以裂解的細(xì)胞，例如HeLa細(xì)胞，采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理
10．使用高純液前，須搖勻后加入 
11．根據(jù)超速離心管的大小調(diào)整高純液的使用量或在樣品上面加上石蠟油填滿
12．通常1克動(dòng)物組織或 108細(xì)胞的溶酶體含量為300微克左右溶酶體蛋白
13．本產(chǎn)皮可以獲得99％以上純度的溶酶體  
14．溶酶體標(biāo)志酶活性測(cè)定，建議使用通用型N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒—70031.1和純化溶酶體酸性磷酸酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒—50318.3 
15．溶酶體形態(tài)和功能染色，建議使用細(xì)胞溶酶體形態(tài)染色試劑盒—10121和純化溶酶體功能中性紅檢測(cè)試劑盒—10323 
16．本公司提供系列溶酶體分析試劑產(chǎn)品
 
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的溶酶體內(nèi)外膜完整
3．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的溶酶體維持正常活性
4．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶