ELSIA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,MMSAM Elisa kit特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*,因此在定量測(cè)定中,每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙,以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,MMSAM Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域。
MMSAM Elisa kit技術(shù)操作要點(diǎn):
- 標(biāo)本的采取和保存。
- 試劑的準(zhǔn)備
- 加樣。
- 保溫。
- 洗滌。
- 顯色和比色。
- 酶標(biāo)比色儀。
- 結(jié)果判斷。
將抗原或抗體固定在過(guò)程稱(chēng)為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。MMSAM Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,MMSAM Elisa kit直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被,其后通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴(lài)氨酸、*等作預(yù)包被,也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被,MMSAM Elisa kit即用親和素先包被載體,然后加入*化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
脂類(lèi)物質(zhì)無(wú)法與固相載體結(jié)合,可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相表面??剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式。
MMSAM Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*:xyA215Hu 人Ⅰ型膠原α2(COL1α2)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Collagen Type I Alpha 2 (COL1a2) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB449Hu 人非神經(jīng)元性烯醇化酶(NNE)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Enolase, Non Neuronal (NNE) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA072Hu 人防御素β2(DEFβ2)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Defensin Beta 2 (DEFb2) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB457Hu 人抗*M1抗體(Anti-GM1)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Anti-Ganglioside M1 Antibody (Anti-GM1) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB461Hu 人天青殺素1(AZU1)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Azurocidin 1 (AZU1) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB463Hu 人軟骨糖蛋白39(GP39)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Glycoprotein 39, Cartilage (GP39) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB464Hu 人溶酶體關(guān)聯(lián)膜蛋白2(LAMP2)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Lysosomal Associated Membrane Protein 2 (LAMP2) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB465Hu 人間隙連接蛋白40(CX40)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Connexin 40 (CX40) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB480Hu 人甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Mannose Binding Lectin (MBL) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB481Hu 人神經(jīng)鈣黏蛋白(CDH2)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Cadherin, Neuronal (CDH2) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB482Hu 人唾液*α1(AMY1)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Amylase Alpha 1, Salivary (AMY1) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyB483Hu 人胰彈性蛋白酶(ELA1)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Elastase 1, Pancreatic (ELA1) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA702Hu 人硫氧化還原蛋白(Trx)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Thioredoxin (Trx) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA703Hu 人硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Thioredoxin Reductase 1 (TrxR1) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA933Hu 人內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Inectin 1 (ITLN1) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA704Hu 人載脂蛋白E(APOE)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Apolipoprotein E (APOE) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA934Hu 人過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Peroxisome Proliferator Activated ReHZptor Alpha (PPARa) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA705Hu 人粘蛋白2(MUC2)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Mucin 2 (MUC2) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA216Hu 人單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP4)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Monocyte Chemotactic Protein 4 (MCP4) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA706Hu 人內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制因子(Vaspin)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for VisHZral Adipose Tissue Derived Serine Protease Inhibitor (Vaspin) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA707Hu 人前胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡE肽(Preptin)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Preptin 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA217Hu 人α1-微球蛋白(α1M)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor (a1M) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml
xyA640Hu 人鈣調(diào)素(CAM)檢測(cè)試劑盒 ELISA Kit for Calmodulin (CAM) 檢測(cè)范圍:9.375-1000pg/ml