性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測(cè)特異性為00%
2. 檢測(cè)試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月?產(chǎn)品名稱:人星狀病毒(HastV)核酸檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。
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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。?二(三基甲硅烷基)乙炔 2 ug pYX22 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5-溴-2-氟甲 2 ug pYX22-VHB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
(S)-(-)-叔丁基亞胺 2 ug RCIscript-GoldyTALEN 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2,6-二甲氧基甲 2 ug RFP-GFP-LC3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2-氯腺嘌呤核苷 2 ug pZL507 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
(S)-4-N-叔丁氧羰基-2-基哌 2 ug RNAi-Ready pSIREN-RetroQ 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
(S)--叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷 2 ug RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-DsRed-Express 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2-溴-5-氟 2 ug RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
順式-,4-二氯-2-丁烯 2 ug RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
D-酒石 2 ug SD2- 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
(四氫-2H-吡喃-4-基)甲醇 2 ug SB D3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
4-氟-2-基 2 ug SB-T6 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
,3-苯二 2 ug SB-T-2A EGFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
L-脯氨 2 ug SB-T 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
代水楊 2 ug SBX00 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
人星狀病毒(HastV)核酸檢測(cè)試劑盒U S-GH(Ultra Sensitive growth hormone) 人超敏生長(zhǎng)激素 CAS: 64-72-2 規(guī)格: 200mg
GDNF 大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 CAS: 77-36- 規(guī)格: 200mg
fractalkine/CX3CL 大鼠趨化因子 CAS: 95-25-0 規(guī)格: 350mg
PSA-U S(Ultra Sensitive Prostate Specific Antigen) 人超敏前列腺特異性抗原 CAS: 95-85-2 規(guī)格: 50mg
FN 大鼠纖連蛋白 CAS: 67-97-0 規(guī)格: 30mg×5ampules
NP9Nandrolone Phenylpropionate) 人苯丙諾龍/苯丙去 CAS: 424-69-8 規(guī)格: 30mg
6- Alpha OHE-(6- AlphaHydroxyestrogen ) 人6α羥基雌酮 CAS: 82-42-9 規(guī)格: 200mg
CNTF 大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 CAS: 04-2-6 規(guī)格: 500mg
BMPR- II 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ CAS: 8-25-4 規(guī)格: 2g
GR- Beta(glucocorticoid receptor- Beta) 人糖皮質(zhì)激素受體β CAS: 87-67-2 規(guī)格: 200mg
BMPR-A 大鼠骨成型蛋白受體A CAS: 67-48- 規(guī)格: 200mg
GR- Alpha(glucocorticoid receptor- Alpha) 人糖皮質(zhì)激素受體α CAS: 規(guī)格: 0mg
BMP-4 大鼠骨成型蛋白4 CAS: 規(guī)格: 00mg
BMP-2 大鼠骨成型蛋白2 CAS: 2594868 規(guī)格: 300mg
u-T3(Ultrasensitivity Tri-iodothyronine) 人高敏*狀腺原氨 CAS: 29342-05-0 規(guī)格: 50mg
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。