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ELISA試劑盒中牛乳中鏈霉素的作用

2013-11-28  閱讀(716)

        ELISA試劑盒初步組裝和穩(wěn)定的每盒點檢查和優(yōu)化,成功建立了一個穩(wěn)定的6個月ELISA試劑盒,并以所組建的試劑盒對牛奶樣品中的添加藥物進行了測定。利用5C10雜交瘤細胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測SM殘留的間接競爭ELISA方法。

 

氨基糖苷類抗生素是一類應(yīng)用廣泛的廣譜抗菌藥物

 

        采用包被抗原稀釋度1∶3200,腹水抗體的工作濃度1∶1.6×105,尺度曲線線性方程為y=1.0522-0.3276x(10~1000ng/ml),半數(shù)按捺濃度為93.22ng/ml,檢測限約為5ng/ml。包括鏈霉素(SM),慶大霉素(GM),卡那霉素(KM)等,對奶牛,子宮內(nèi)膜炎奶牛乳腺炎效果很好,通常用于獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。

 

        患有乳腺炎的奶牛鏈霉素肌肉注射和乳腺癌藥物治療,用本試劑盒牛奶中鏈霉素殘留濃度測定試劑盒,放棄了給藥后至少2D和4.5天證明牛奶。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了鏈霉素的5種人工抗原,從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進行比較,*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原,通過雜交瘤技術(shù)獲得1株能不亂分泌抗鏈霉素特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株5C10。

 

通過實驗比較了5種樣品處理方法,選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測定。

 

        探索一種能夠檢測牛奶中鏈霉素殘留量的快速和有效的方法,本研究采用單克隆抗體技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù),合成人工抗原,制備出抗鏈霉素單克隆抗體,建立了檢測牛奶中SM殘留的ELISA測定法,組建成鏈霉素快速檢測ELISA試劑盒并進行了優(yōu)化和實際應(yīng)用。

 

         作為一種靈活,快速,特異的方法,酶聯(lián)免疫吸附測定法已逐漸被應(yīng)用于藥物殘留,在國內(nèi)外建立了理化檢測鏈霉素基地左乳,固然有些方法比較敏捷、,但因為方法復(fù)雜、耗時長、花費大、技術(shù)要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。制備的腹水效價為1∶1280000,蛋白濃度為26.2mg/ml,與其他抗菌藥物的交叉反應(yīng)率均低于0.1%。

 

         ELISA試劑盒尺度曲線的批內(nèi)變異系數(shù)為11.87%,均勻批間變異系數(shù)為8.017%。建立ELISA尺度曲線的線性方程為y=1.8061-0.4932x(線性范圍25~2500ng/ml),其LOD為8.11ng/ml,低于劃定的牛奶中鏈霉素zui低殘留*200ng/ml。然而,行政違法引起動物產(chǎn)品特別是哺乳期的牛奶中的獸藥殘留,對人體健康的潛在危害。



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