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吖啶橙染色液說明書

2015-5-27  閱讀(1047)

簡介:吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性,能透過細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測。哈靈生物吖啶橙染色液(1mg/ml)為儲存液,使用時(shí)應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。    

規(guī)格:10ml    保存條件:4℃ 避光       

操作步驟(僅供參考): 

1、 收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測時(shí),應(yīng)先固定細(xì)胞),用PBS清洗細(xì)胞1次,計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié) 細(xì)胞濃度至106/ml。  

2、 取適量的細(xì)胞懸液,加入Acridine Orange Stain(1mg/ml),輕輕混勻。 

3、 室溫避光染色15~20ml,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。 

4、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長488nm,阻斷濾光片波長515nm),計(jì)數(shù)并拍照。   


染色結(jié)果:正常細(xì)胞 細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮,細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒    

注意事項(xiàng):

1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑,較少單獨(dú)使用。  

2、吖啶橙染色常與EB染色合用,可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。 

3、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。  

4、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。  






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