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德國(guó)* *Ultrapure 100 Buffer Set 高品質(zhì)

性能

使用Ultrapure 100 Buffer Set可純化多至100 mg的不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA，該系統(tǒng)結(jié)合了QIAGEN陰離子交換技術(shù)與內(nèi)毒素去除技術(shù)，可用于制備超純DNA。其的分離性能可確保制備的DNA純度高，不低于通過(guò)連續(xù)兩輪CsCl梯度離心制備的DNA純度。

Ultrapure 100 Buffer Set提供的用于交換樹(shù)脂的緩沖液，經(jīng)驗(yàn)證其所含內(nèi)毒素含量均低于10 EU/ml（BioWhittaker Kinetic-QCLTest驗(yàn)證）。

原理

純化的質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素污染水平取決于純化方式。硅膠純化的DNA表現(xiàn)出*的內(nèi)毒素污染水平。使用QIAGEN、QIAfilter和HiSpeed的質(zhì)粒DNA純化試劑盒，以及通過(guò)兩次CsCl超速離心所制備的DNA純度很高，內(nèi)毒素污染水平相對(duì)較低。QIAGEN Ultrapure 100 system含有內(nèi)置的內(nèi)毒素去除步驟，純化得到的質(zhì)粒DNA的內(nèi)毒素含量低于0.1 EU/µg。

內(nèi)毒素，也被稱為脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性菌細(xì)胞膜的組成成分之一（參見(jiàn)Bacterial cell wall）。在質(zhì)粒純化的裂解過(guò)程中，內(nèi)毒素釋放出來(lái)，對(duì)于內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞系，可嚴(yán)重降低其轉(zhuǎn)染效率。另外內(nèi)毒素會(huì)與DNA競(jìng)爭(zhēng)轉(zhuǎn)染試劑，影響質(zhì)粒DNA的攝取量。內(nèi)毒素還會(huì)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞發(fā)生非特異性免疫活化反應(yīng)，導(dǎo)致對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果的錯(cuò)誤解讀，包括誘導(dǎo)合成蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，如IL-1和前列腺素?？偟膩?lái)說(shuō)，內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染反應(yīng)中是不可控變量，影響反應(yīng)結(jié)果及結(jié)果的重復(fù)性，使結(jié)果難以比較和分析。在基因治療研究中，內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致內(nèi)毒素休克綜合癥和補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)，影響研究結(jié)果。

操作流程

細(xì)菌菌體在堿性環(huán)境下裂解，并通過(guò)離心澄清裂解液（參見(jiàn)Ultrapure 100 procedure）。使用的Endotoxin Removal Buffer除去內(nèi)毒素，并將裂解液上載到Ultrapure 500 Resin。

應(yīng)用

Ultrapure 100 Buffer Set配合Ultrapure 500 Resin純化的質(zhì)粒DNA，其純度相當(dāng)于兩次CsCl梯度離心所純化的DNA的純度。簡(jiǎn)單的內(nèi)毒素去除步驟可確保純化的DNA所含內(nèi)毒素不超過(guò)0.1 EU/µg DNA。純化的DNA適用于多種敏感的應(yīng)用，包括：