HCCC-9810膽管細胞型肝癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)HCCC-9810膽管細胞型肝癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
2,6-DIFLUORO-3-METHOXYBENZALDEHYDE 2,6-二氟-3-甲氧苯甲醛 149949-30-4
2,6-difluoronitrobenzene 2,6-二氟硝基苯 19064-24-5
2-ACETAMIDO-2-DEOXY-BETA-D-GLUCOSAMINE 2-乙酰氨基-2-脫氧-BETA-D-吡喃葡萄糖胺 14131-68-1
1-METHYL-4,5,6,7-TETRAHYDRO-1H-PYRROLO[3,2-C]PYRIDINE 4,5,6,7-四氫-1-甲基-1H - 吡咯并[3,2-C]吡啶 569351-26-4
1-Methyl-4-[(4-nitrophenyl)Methoxysulfonyl]benzene 4-甲基苯磺酸 4-硝基芐酯 4450-68-4
1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine hydroChloride 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽 23007-85-4
1-Methyl-4-propan-2-ylidene-7-oxabicyclo[4.1.0]heptan-5-one 35178-55-3
1-Methyl-5-(tributylstannyl)-3-(trifluoroMethyl)-1H-pyrazole 1-甲基-5-(三丁基錫烷基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑 191606-78-7
1-BROMO-2-IODO-4,5-DIMETHOXYBENZENE 89978-46-1
1-BroMo-3,5,5,-TriMethylhexane 50915-80-5
1-BroMo-3,7-diMethyl octane 1-溴-3,7-二甲基辛烷 3383-83-3
1-BroMo-3-chloro-2-Methoxybenzene 2-BROMO-6-CHLOROANISOLE 174913-10-1
1-BROMO-3-FLUOROPROPANE 1-溴-3-氟丙烷 352-91-0
1-broMo-3-nitrobenzene 間溴硝基苯 585-79-5
1-BROMO-4,4-DIMETHYLPENTANE 6570-95-2
1-BroMo-4-fluorobenzene 對溴氟苯 460-00-4
1-BroMo-4-isobutylbenzene 1-溴-4-異丁基苯 2051-99-2
1-BROMO-5-FLUOROPENTANE 1-溴-5-氟戊烷 407-97-6
1-BroMo-5-phenylpentane (5-溴正戊基)苯 14469-83-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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