SK-BR-3乳腺腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SK-BR-3乳腺腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1,2-BIS(PYRROLIDINO)-ETHANE 21408-05-9
1,2-BIS(TOSYLOXY)ETHANE 1,2-雙甲苯氧基乙烷 6315-52-2
1,2-bis[2-(2-Methoxyethoxy)ethoxy]ethane 1191-87-3
1,1′-Bis(diphenylphosphino)ferrocene-palladiuM(II)dichloride dichloroMethane coMplex [1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀 72287-26-4
英文名稱 中文名稱 CAS號
[(1R,2S,3R,5R)-2,6,6-TriMethylbicyclo[3.1.1]hept-3-yl]borane [(1R,2S,3R,5R)-2,6,6-*基雙環(huán)[3.1.1]庚-3-基]硼烷 64234-27-1
[(2,3-dihydro-1,5-diMethyl-3-oxo -2-phenyl-1H-pyrazol-4-yl)Methyl aMino]Methanesulphonic acid 50567-35-6
glycerol palMitate ganyou棕櫚酸酯 26657-96-5
[(4-Methoxyphenyl)Methyl] hydrogen (4-hydroxyphenyl)Malonate *鈉 7-位側(cè)鏈 78641-40-4
DifluoroMethyl phenyl sulfone [(二氟甲基)磺?;鵠苯 1535-65-5
[(S)-dihydro-2,5-dioxo-3-furyl]aMMoniuM chloride (3S)-3-氨基二氫-2,5-呋喃二酮鹽酸鹽 34029-31-7
[[(2-hydroxyethyl)iMino]bis(Methylene)]bisphosphonic acid 5995-42-6
AM-2201 [1-(5-氟戊基)-1H-吲哚-3-基]-1-萘基甲酮 335161-24-5
[1,1':4',1''-terphenyl]-4-aMine. 4′1〞-四苯基]-4-胺/Β-TTA 145693-79-4
Dityrosine 980-21-2
Solabegron 252920-94-8
[1,1'-Biphenyl]-4-propanoicacid, a-aMino 4-苯基-DL-苯* 76985-08-5
[2-(4-Morpholinyl)-3-pyridinyl]MethanaMine 870063-29-9
[2-(METHACRYLOYLOXY)ETHYL]TRIMETHYLAMMONIUM METHYL SULFATE N,N,N-*基-2-[(2-甲基-1-氧代-2-丙基)氧]-乙氨甲基硫酸酯 6891-44-7
4,4'-DITHIO-2,2'-BIPYRIDINE 101028-40-4
[2-[(8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-dihydroxy-10,13,16-triMethyl-3-oxo-6,7,8,11,12,14,15,16-octahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-oxoethyl] Methanesulfonate 2265-22-7
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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