MLTC-1睪丸間質(zhì)細胞瘤細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)MLTC-1睪丸間質(zhì)細胞瘤細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(-)-egcg-3''-o-Me 表沒食子兒茶素 3-O-(3-O-甲基)沒食子酸酯 83104-87-4
(-)-Epiafzelechin (-)-表阿夫兒茶精 24808-04-6
(+)-Epicatechin (+)-表兒茶素 35323-91-2
Epicatechin Gallate 表兒茶素沒食子酸酯 1257-08-5
(-)-GALLOCATECHIN (-)-倍兒茶酸 3371-27-5
(-)-GALLOCATECHIN-3-GALLATE 5127-64-0
(-)-lariciresinol 83327-19-9
(-)-N-(DiphenylMethylene)glycinyl-(2R)-bornane-10,2-sultaM (R)-(-)-N-(二苯亞甲基)甘氨酰左旋樟腦磺內(nèi)酰胺 138566-17-3
(-)-SPARTEINE 鷹爪豆堿 90-39-1
Sparteine sulfate pentahydrate 五水合硫酸司巴丁 6160/12/9
(-)-STYLOPINE 人血草鹼 4312-32-7
(-)-TRANS-PINOCARVEOL (-)-反式一松香芹醇 547-61-5
(S)-(-)-Blebbistatin 856925-71-8
(+)-[(R)-1-broMoethyl]benzene 1459-14-9
(+)-2,3,4,6-tetrahydro-9-Methoxy-1,2,5-triMethyl-1H-pyrido[4,3-b]carbazole 16101-11-4
(+)-2,3-O-Isopropylidene-L-threitol (+)-2,3-O-亞異丙基-L-蘇力糖醇 50622-09-8
(+)-5-Iodo-2'-deoxyuridine * 54-42-2
(+)-Cis-Ddioxolane 16709-43-6
(+)-Cloprostenol sodiuM 氯前列烯醇鈉 62561-03-9
(+)-CORYDALINE 紫菫定酚 476-69-7
(+)-CORYPALMINE 紫菫巴明鹼 6018-40-2
(+)-Dehydroabietic acid (+)-脫氫樅酸 1231-75-0
δ-Cadinene 483-76-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |