MDCK NBL-2狗腎細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)MDCK NBL-2狗腎細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Tris(4-aMinophenyl)Methane 4,4’,4"-三氨基三苯甲烷 548-61-8
TRIS(4-METHYL-8-HYDROXYQUINOLINE)ALUMINUM 三(4-甲基-8-羥基喹啉)鋁 14752-00-2
TRIS(ACETONITRILE)TRICARBONYLTUNGESTEN 三(乙酰腈)三羰基鎢 16800-47-8
Tris(dibenzoylMethane)Mono (phenanthroline)erbiuM 三(二苯甲酰甲烷)單(菲羅啉)鉺 61918-86-3
TRIS(DIBENZOYLMETHANE)MONO (PHENANTHROLINE)EUROPIUM (III) 三(1,3-二苯-1,3-苯三羥基)(1,10-鄰二氮雜菲) 17904-83-5
TRIS(DIBENZYLIDENEACETONE)DIPLATINUM(0), 99 三(二亞芐基茚丙酮)二鉑 35915-79-8
TRIS(TRIMETHYLSILYL)PHOSPHINE 氘代3-氨基-5-嗎啉-4-甲基-惡唑-2-啉酮 15573-38-3
tris[(1-oxooctadecyl)anthranilato-O1,O2]chroMiuM 94232-91-4
Tris[3,5-bis(trifluoroMethyl)phenyl]phosphine 三[3,5-二(三氟甲基)苯基]* 175136-62-6
TrisodiuM citrate dihydrate 檸檬酸鈉 6132/4/3
TrisodiuM diphospahte or E450 二磷酸三鈉 14691-80-6
Tianeptine sodiuM salt 噻奈普汀鈉鹽 30123-17-2
Tiazofurine 噻唑呋林 60084-10-8
tibezoniuM iodide 替貝碘胺 54663-47-7
TICAGRELOR 替卡格雷 274693-27-5
Tigecycline * 220620-09-7
Tiglylglycine N-巴豆?;? 35842-45-6
Tildipirosin 泰地羅新 328898-40-4
TiletaMine HCL 39307-54-5
Tilia cordata 歐洲椴(TILIA CORDATA)花提取物 84929-52-2
Tilorone 替洛隆 27591-97-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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