OK負鼠opossum腎細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)OK負鼠opossum腎細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
METHYL GLUCOSE SESQUISTEARATE 甲基-D-吡喃葡糖苷硬脂酸酯(2:3) 68936-95-8
Mandelic acid 扁桃酸 611-71-2
Manganese antiMonide 銻化錳 12032-82-5
Manganese antiMonide 銻化錳 12032-97-2
Manganese boride 12045-15-7
MANGANESE NITRIDE 氮化錳 12033-07-7
L-Aspartic acid L-天* 56-84-8
Latanoprost 拉坦前列腺素 130209-82-4
L-a-tert-Butyl-Gly-OtBu?HCl 31556-74-8
Latrepirdine 2,3,4,5-四氫-2,8-二甲基-5-[2-(6-甲基吡啶-3-基)乙基]-1H-吡啶并[4,3-B]吲哚 3613-73-8
laureth sulfate SLES 70% 月桂醇聚氧乙烯醚硫酸酯鈉鹽 9004-82-4
Laureth-7 十二烷基七聚乙二醇醚 3055-97-8
LaurocapraM 月桂氮酮 59227-89-3
Lauryl Benzoate C12-15 醇苯甲酸酯 68411-27-8
N,N diMethyl-n-laurylbetaine (LNB) 月桂基甜菜堿 683-10-3
LAURYL THIOGLYCOLATE 巰基醋酸十二酯 3746-39-2
LAVANDULOL 熏衣草醇 498-16-8
L-Buthionine-sulfoxiMine 丁硫氨酸-亞砜亞胺 83730-53-4
L-CARNITINE-D3 HCL (METHYL-D3) 350818-62-1
LCG 21561 56065-38-4
L-Cyclobutylglycine L-環(huán)丁基* 49607-08-1
L-Cycloserine 環(huán)* 339-72-0
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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