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人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法

時(shí)間:2014-8-11閱讀:635
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人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法 采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)多克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)含量。

 

人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為0.312-80ng/ml,超過此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果(0.312-80ng/ml范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。

9、底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。

人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法

 

人成纖維細(xì)胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法

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