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斜面培養(yǎng)基的制作方法
點(diǎn)擊次數(shù):352 發(fā)布時(shí)間:2017-2-21
斜面培養(yǎng)基相對和并列的概念是:平面培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基倒在培養(yǎng)皿內(nèi),凝固成平面的稱為平板培養(yǎng)基,用于菌種分離及研究菌類的某些特性;分裝在試管內(nèi),直立凝固而制成的稱為高層培養(yǎng)基,這樣接入菌種后雖然發(fā)育的面小了一點(diǎn),但培養(yǎng)基的厚度增大,營養(yǎng)豐富,時(shí)間長些也不容易干燥、開裂,常用于保存菌種。
1、配制溶液
向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,按照培養(yǎng)基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,zui后補(bǔ)足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質(zhì),需加熱溶解,加熱過程所蒸發(fā)的水分,應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。
配制固體培養(yǎng)基時(shí),先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續(xù)加熱至*融化。并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。
2、調(diào)節(jié)pH值
用pH試紙(或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì))測試培養(yǎng)基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié),直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。
3、過濾
用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時(shí),折疊成六層,用濾紙過濾時(shí),可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過濾。
4、分裝
已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。如果要制作斜面培養(yǎng)基,須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基,則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi)。
分裝時(shí),一手捏松彈簧夾,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí),注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。
裝入試管的培養(yǎng)基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí),每只15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度),如制作深層培養(yǎng)基,每只20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,一般以其容積的一半為宜。
5、加棉塞
分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時(shí),要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時(shí)左手食指與拇指稍稍緊握,就會形成1個(gè)長棒形的棉塞。棉塞作成后,應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶內(nèi),上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札,準(zhǔn)備滅菌。