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摘要:通過檢測(cè)*甲素與*聯(lián)合使用時(shí)對(duì)裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型的療效。結(jié)果顯示*甲素(Triptolide, TPL)與*(CDDP)聯(lián)合使用能有效地抑制裸鼠SC-M1胃癌腫瘤的生長(zhǎng),且抑制效果明顯優(yōu)于*甲素或*單獨(dú)使用。
關(guān)鍵詞:*甲素, *, 裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型,抗腫瘤, SC-M1
一、 實(shí)驗(yàn)原理
*是一個(gè)有著悠久、廣泛應(yīng)用歷史的中藥。*甲素是*的主要活性成分之一,是一個(gè)具有多種生物活性的天然產(chǎn)物,來源于中藥*的根,研究表明它具有抗氧化,抗類風(fēng)濕,抗老年性癡呆癥、抗癌等功效。現(xiàn)代研究表明*甲素不僅有抗類風(fēng)濕作用,還有抗癌作用,在美國(guó)正在進(jìn)行一期抗癌臨床研究。zui近的研究發(fā)現(xiàn),*甲素除了特異地影響某些蛋白和信號(hào)通路以外,還會(huì)抑制廣泛的基因轉(zhuǎn)錄,但其作用機(jī)理有待進(jìn)一步明確。
裸鼠為嚴(yán)重免疫缺陷的小鼠,對(duì)人源性癌細(xì)胞或組織免疫排異極小,目前將人類腫瘤細(xì)胞系移植到免疫缺陷的裸鼠體內(nèi)所建立的人類異種移植物腫瘤模型,已經(jīng)廣泛用于臨床前抗癌藥藥效的檢測(cè)。
二、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
觀察*甲素與*聯(lián)合使用時(shí)對(duì)裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型的療效。
三、 實(shí)驗(yàn)材料
1. 實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
*甲素 (T3652,Sigma);*(P4394,Sigma);SC-M1胃癌細(xì)胞(CRL-5822,ATCC);動(dòng)物品系:SCID裸鼠 (SPF級(jí));體重:18-20g/6周齡;性別:雄性; 動(dòng)物數(shù):每組6只,共5組,共30只。
2. 數(shù)據(jù)分析
GraphPad Prism(Ver. 5,GraphPad Software) 作圖,并進(jìn)行雙側(cè)t檢驗(yàn)。
四、 實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)共分為以下幾個(gè)步驟:
1. SC-M1細(xì)胞培養(yǎng):
取液氮凍存的SM-C1細(xì)胞株,復(fù)蘇后,置37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。
2. 腋下成瘤:
SM-C1經(jīng)傳代培養(yǎng)后,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,用PBS制備成5×107細(xì)胞/ml濃度的細(xì)胞懸液,接種于裸鼠腋部皮下(每只小鼠100μl,共計(jì)5×106細(xì)胞)。待能觀察到腫瘤后,隨機(jī)分為4組。
3. 給藥:
實(shí)驗(yàn)分組及給藥:
1)陰性對(duì)照組 PBS(靜脈注射, 一周三次,連續(xù)三周)。
2)*甲素治療組0.4mg/kg(靜脈注射,一周三次,連續(xù)三周)。
3)*治療組3mg/kg(靜脈注射,一周三次,連續(xù)三周)。
4)*甲素+*聯(lián)合治療組 (TPL,0.4mg/kg;CDDP,3mg/kg)(靜脈注射,一周三次,連續(xù)三周)。
5)按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案給藥。所應(yīng)用的飼料、墊料、籠具及接觸的器械等均應(yīng)高壓消毒后使用,裸鼠置于層流架中飼養(yǎng)。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄和分析:
動(dòng)態(tài)觀察和測(cè)試腫瘤大小以及荷瘤鼠體重,每2天用卡尺測(cè)量各裸鼠腫瘤的短徑(a)及長(zhǎng)徑(b),按(a2×b)/2公式計(jì)算腫瘤體積。根據(jù)測(cè)量計(jì)算的腫瘤體積計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積(RTV),RTV=Vt/V0。其中V0為隨機(jī)分組(即d0)時(shí)的腫瘤體積,Vt為每一次測(cè)量(即dn)時(shí)的腫瘤體積。三周后處死各組動(dòng)物,剖取腫瘤稱重,按下列公式計(jì)算相對(duì)腫瘤增殖率:相對(duì)腫瘤增殖率%=(給藥組RTV/對(duì)照組RTV)×100%。
五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1. 各治療組腫瘤大小比較
圖2. 各治療組腫瘤大小統(tǒng)計(jì)分析
***表示p<0.001,**表示p<0.05
從圖1和圖2的結(jié)果可以看到,*甲素與*聯(lián)合用藥可以有效的抑制SC-M1胃癌細(xì)胞腫瘤在SCID小鼠模型中的生長(zhǎng),且效果優(yōu)于兩種藥物單獨(dú)使用。
六、 參考文獻(xiàn)
1. Li CJ, Chu CY, Huang LH, et al. Synergistic anticancer activity of triptolide combined with cisplatin enhances apoptosis in gastric cancer in vitro and in vivo. Cancer Lett. 2012; 2: 203-213
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