Abcam抗體保存指南

本指南以abcam抗體保存方法為主，同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分公司的抗體產(chǎn)品！請不時核查抗體數(shù)據(jù)表以獲取特定保存建議。

 保存溫度和條件

對于很多抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是*保存條件。分裝成小等份可zui大程度減少由凍融造成的損傷，以及從單個試劑瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需凍融一次，如有剩余，可將剩余物保存于4℃。在收到抗體時，在10000×g下離心20秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液，并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中。小等份的量取決于實驗人員在實驗中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10μl；等份越小，儲液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。

在大多數(shù)情況下，收到抗體時在4℃下保存一至兩周，然后再冷凍進行長期保存是可以接受的，但也許腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而應(yīng)該盡快凍存。同樣，遵照數(shù)據(jù)表上的建議是重要的。

其他特別條件：

• 酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存，而應(yīng)保存于4℃。凍融不僅影響抗體結(jié)合能力，還會降低酶活性。
• 無論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是生物素，偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹。暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響，在實驗的所有階段都應(yīng)避光。
• IgG3同型抗體具有解凍時形成聚集物的*趨勢，應(yīng)始終保存于4℃。

用*防止污染

為了防止微生物污染，可將*加入抗體制備品中達到0.02%（w/v）的終濃度。很多abcam抗體已經(jīng)包含這種防腐劑，所用濃度范圍為0.02至0.05%。

不使用*的情形：

• 如果用抗體染色或處理活細胞，或如果用抗體進行體內(nèi)研究，一定要使用不包含*的制備品。該抗菌劑也對大多數(shù)其它生物具有毒性：它阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
• *會干擾氨基參與的任何偶聯(lián)，應(yīng)在偶聯(lián)進行前除去。偶聯(lián)后，抗體可保存于*中，除此之外，0.01%硫汞撒（硫柳汞）不含伯胺，也是可接受的替代物。

*可通過透析或凝膠過濾從抗體溶液中除去。IgG的分子量為150000道爾頓（IgM為約600000）；*的分子量為65道爾頓。截留分子量為14000道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時使疊氮化物向外擴散。在保持于4℃的磁性攪拌器上的燒杯中，每毫升抗體使用至少一升冷PBS并攪拌透析裝置6小時。更換PBS兩次，每次更換攪拌至少6小時。如有可能，所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無菌操作。

冷凍/融化損傷

• 重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性，導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。
• 保存于-20℃對于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)模槐４嬗?80℃無明顯優(yōu)勢。冰箱不能為無霜型。這些冷凍和融化之間的循環(huán)（以減少結(jié)霜）恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因，抗體試劑瓶應(yīng)置于具有zui小溫度波動的冰箱區(qū)域，例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
• 有些研究人員加入冷凍保護劑甘油達到50%的終濃度以防止冷凍/融化損傷；甘油可將凝固點降低至低于-20℃。雖然這對于很多抗體是可接受的，但是只有一小部分我們提供的抗體測試了在該保存條件下的穩(wěn)定性，并且我們的保證僅使用于按數(shù)據(jù)表上推薦的方式保存的抗體。不建議將包含甘油的溶液保存于-80℃，因為該溫度低于甘油的凝固點。請注意甘油可被細菌污染。如果加入甘油或任何冷凍保護劑，則應(yīng)當(dāng)小心操作，以得到無菌制備物。
• 應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在4℃下保存超過一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時一般不易降解，理想的濃度為1mg/ml或更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如BSA作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ)。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失。對于打算進行偶聯(lián)的抗體而言，由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會與抗體競爭，降低了偶聯(lián)的效率，所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)。