一、清洗 

新采用和重新使用的培養(yǎng)器皿，都要嚴格清洗，以防各種有害物質對培養(yǎng)細胞損害。培養(yǎng)用的塑料器皿目前主要依靠進口，均已無菌密封包裝，可直接使用。對于塑料瓶蓋或膠塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自來水中浸泡和蒸餾水漂洗2～3次，晾干備用。細胞培養(yǎng)中的絕大部分器皿系玻璃制品，清洗過程為以下步驟。 
1.浸泡　新使用或重復使用的玻璃器皿須經5％鹽酸溶液或自來水浸泡過夜或煮沸30min，水洗。以去除新購進玻璃器皿所帶有灰塵、鉛、砷等物質，并消除其弱堿性。 
2.刷洗　浸泡后用軟毛刷和的洗潔精進行刷洗。 
3.酸浸　刷洗后的玻璃制品酸浸前須適當晾干或烘干，以免造成酸浸液稀釋，影響效果。將玻璃制品*浸泡入清潔液中24h。清潔液具有*酸蝕作用，操作過程需戴防護用具。 
4.沖洗　浸酸后的玻璃器皿先用自來水充分沖洗，吸管需沖洗10min，器皿需每瓶灌滿自來水、倒掉反復10次以上，不留任何酸浸液殘跡，然后用蒸餾水漂洗2～3次，烘干備用。要求干凈透明，無油煙，不能殘留任何有害物質及化學藥品等。 
    二、消毒 
1. 包裝　器材經清洗烤干或晾干后，先應嚴格包裝，然后再行消毒滅菌處理，以防止消毒滅菌后再次遭受污染。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。 
2. 消毒　消毒滅菌隨物品的不同，而采用不同的方法。 
（1）紫外線：主要用于消毒實驗室空氣、工作臺面和一些不能使用其他方法消毒的培養(yǎng)器皿。進無菌室前或做完實驗后，均應開燈照射30min進行消毒。紫外線照射60min可以消滅空氣中大部分細菌。 
（2）消毒劑：操作者的皮膚、培養(yǎng)瓶的蓋和外壁常用碘酒、酒精消毒。無菌室內桌椅和物體的消毒可用0.1％新潔爾滅、過氧乙酸、來蘇兒等擦拭或浸泡。實驗室、無菌室的消毒可用甲醛熏蒸（*5～7.5g，加40%甲醛10～15ml，混合放入一開放容器內，立即可見白色甲醛煙霧，房間密閉24h即可）。 
（3）干熱消毒：多用于玻璃器皿消毒，干熱烤箱180℃45～60min。 
（4）濕熱消毒：培養(yǎng)液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa（115℃）高壓滅菌10min；布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa（121.3℃）高壓滅菌15～20min。 
（5）濾過消毒：用孔徑200～450nm大小的濾板可除去培養(yǎng)液和 試劑 中的細菌和霉菌等。用200nm孔徑的濾板通過兩次，可使支原體達到某種程度的去除，但不能除去病毒。濾器分為負壓和加壓式兩種。過濾的液體量很少時，可選用注射器微量濾膜濾器。 
（6）60Co照射：不耐熱的塑料制品或一次性用品的滅菌可經包裝后，用γ射線照射消毒。 
    三、無菌操作 
    無菌操作是防止污染、決定培養(yǎng)是否成功的首要條件。由于體外培養(yǎng)細胞缺乏抗感染能力，在一切操作中要努力做到zui大限度的無菌。工作前對手部需清洗消毒，進無菌操作室時戴口罩和穿工作服。不能用手直接觸及已消毒器皿內部。打開培養(yǎng)瓶前或封閉瓶口前須火焰燒灼瓶口等。