酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
哺乳動(dòng)物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase），廣泛分布于組織和器官，屬于Ser水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解，但不能催化水解乙酰及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝，并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān)，有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。
酯酶系列_羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定原理：
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固籃顯色；在450 nm光吸收增加速率，計(jì)算CarE活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體15mL×2瓶， 4℃保存；
試劑三：粉劑×2支， 4℃保存，臨用前取1支試劑三，加0.6ml無水乙醇充分溶解；
試劑四：粉劑×2支，-20℃保存，臨用前取1支試劑四，加少量試劑二溶解；
工作液配制：臨用前配制，向1瓶試劑二中，加入溶解后的試劑三和試劑四各1支，充分溶解，過濾，4℃避光保存，可用1周。
粗酶液提?。?/p>
細(xì)菌、細(xì)胞樣品制備
收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；12000g 4℃離心30min，取上清液待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿；12000g 4℃離心30min，取上清液待測(cè)。
3、液體：直接測(cè)定
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL蒸餾水和200μL試劑二，迅速混勻，于450nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化，第10s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2?！鰽空白管=A2-A1
4. 測(cè)定管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL上清液和200μL試劑二，迅速混勻，于450nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化，第10s吸光值記為A3，第190s吸光值記為A4?！鰽測(cè)定管=A4-A3
注意：空白管只需測(cè)定一次。
環(huán)保在線