糖酵解系列_己糖激酶(HK)測試盒_微量法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
HK(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是葡萄糖分解過程中的個關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。
糖酵解系列_己糖激酶(HK)測試盒_微量法
測定原理:
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1支,-20℃保存;
樣本的前處理:
1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。